本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附試驗原理，將純化的大鼠ADM特異性抗體包被于酶標(biāo)板作為固相捕獲載體。加入待測樣本和標(biāo)準(zhǔn)品后，其中的ADM抗原與固相抗體特異性結(jié)合，洗孔去除未結(jié)合成分，再加入酶標(biāo)記ADM檢測抗體，形成完整的免疫復(fù)合物。通過TMB底物顯色、酸性終止液終止反應(yīng)，檢測吸光度值，依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線可精準(zhǔn)定量大鼠樣本中腎上腺髓質(zhì)素ADM的濃度。
產(chǎn)品參數(shù)：

?靈敏度：最低檢測濃度0.2pg/mL，超高靈敏度檢測微量ADM多肽。

檢測范圍：0.6pg/mL - 120pg/mL，適用于大鼠血清、腎上腺組織、血漿樣本。

反應(yīng)時間：總時長100分鐘，樣本溫育40分鐘、二抗溫育35分鐘、顯色25分鐘。

保存條件：2-8℃避光保存，濃縮試劑低溫密封，禁止反復(fù)凍融。

有效期：未開封有效期12個月，開封后1個月內(nèi)用完。

特異性：特異性結(jié)合大鼠ADM，與腎上腺其他活性多肽無交叉反應(yīng)。

重復(fù)性：板內(nèi)CV≤7.2%，板間CV≤9.2%，內(nèi)分泌多肽檢測數(shù)據(jù)穩(wěn)定。

注意事項：血漿樣本需添加抗凝劑，避免凝血因子干擾；樣本需低溫保存。
實驗前準(zhǔn)備工作：

1. 試劑平衡與稀釋

試劑盒所有組分（酶標(biāo)板、標(biāo)準(zhǔn)品、酶結(jié)合物、底物、洗滌濃縮液、樣本稀釋液、終止液）從 2~8℃取出，室溫（20~25℃）放置平衡 30min，嚴(yán)禁直接低溫操作。

濃縮洗滌液配制：按標(biāo)簽標(biāo)注比例用去離子純水稀釋（常見 20× 濃縮液：1 份濃縮液 + 19 份純水），混勻備用，現(xiàn)配現(xiàn)用。

標(biāo)準(zhǔn)品復(fù)溶 / 梯度稀釋：

凍干標(biāo)準(zhǔn)品加入配套標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液充分溶解，室溫靜置 10min，輕柔吹打混勻；

按說明書梯度倍比稀釋出 5~7 個濃度梯度標(biāo)準(zhǔn)品，單獨標(biāo)記，剩余原液分裝 - 20℃避光保存，避免反復(fù)凍融。

待測樣本預(yù)處理：血清 / 血漿、組織勻漿、細(xì)胞上清用樣本稀釋液適當(dāng)稀釋，渾濁樣本 12000r/min 離心 10min 取上清；溶血、脂血嚴(yán)重樣本棄用。

2. 耗材與設(shè)備準(zhǔn)備

設(shè)備：恒溫 37℃孵育箱、酶標(biāo)儀（450nm 主波長，630nm 參比）、多通道移液槍、吸水濾紙、洗板機(jī)（或手動洗板槽）、封板膜、離心管。

耗材無核酸酶、無熱源、無蛋白污染，移液槍提前校準(zhǔn)。

取出本次實驗所需酶標(biāo)板條，剩余未使用板條裝入鋁箔密封袋，加干燥劑 2~8℃避光保存。

3. 孔位規(guī)劃標(biāo)記

酶標(biāo)板做好分區(qū)標(biāo)記：空白孔、零標(biāo)準(zhǔn)孔、梯度標(biāo)準(zhǔn)品孔、待測樣本孔、復(fù)孔（所有樣本、標(biāo)準(zhǔn)品建議設(shè)置雙復(fù)孔降低誤差）。

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實驗操作流程：

試劑盒常溫放置 28min，按說明稀釋洗滌液，梯度稀釋 ADM 標(biāo)準(zhǔn)品，標(biāo)記酶標(biāo)板孔位類型，大鼠血清樣本低溫解凍后稀釋備用。

標(biāo)準(zhǔn)孔加入 ADM 梯度標(biāo)準(zhǔn)液 50μL，樣本孔加入稀釋血清樣本 50μL，空白孔添加樣本稀釋液 50μL，全孔加入酶結(jié)合物工作液 100μL，密封封板。

37℃避光孵育 56min，特異性免疫結(jié)合完全反應(yīng)。

去除封板棄凈液體，洗滌液注滿每孔浸泡 39s，甩干洗板 5 次，清除非特異性吸附物質(zhì)。

每孔依次添加顯色 A 液、B 液各 50μL，震蕩混勻，37℃避光顯色 15min。

加入終止液 50μL 終止顯色，輕搖酶標(biāo)板混勻體系。

15min 內(nèi) 450nm 測吸光度，換算樣本 ADM 濃度。