本試劑盒采用競(jìng)爭(zhēng)法ELISA檢測(cè)原理,適配大鼠小分子多肽SS的定量檢測(cè)。酶標(biāo)板預(yù)先包被SS抗原,檢測(cè)時(shí)樣本中的內(nèi)源性生長(zhǎng)抑素與固相包被SS抗原競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合限量的酶標(biāo)記特異性抗體。樣本中SS含量越高,結(jié)合固相的酶標(biāo)抗體越少,顯色吸光度值越低。通過標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合濃度與吸光度的對(duì)應(yīng)關(guān)系,精準(zhǔn)測(cè)定大鼠樣本中SS的含量。
產(chǎn)品參數(shù):
產(chǎn)品名稱 | 大鼠生長(zhǎng)抑素(SS)ELISA試劑盒 | 貨號(hào) | Y-E1382 |
英文名稱 | SS ELISA Kit | 規(guī)格 | 48T/96T |
?靈敏度:最低檢測(cè)濃度0.2pg/mL,微量生長(zhǎng)抑素可精準(zhǔn)定量。
檢測(cè)范圍:0.6pg/mL - 85pg/mL,適用于大鼠血清、胰腺、下丘腦組織樣本。
反應(yīng)時(shí)間:全程90分鐘,37℃樣本溫育35分鐘、二抗溫育30分鐘、顯色25分鐘。
保存條件:2-8℃冷藏避光,所有試劑組分密封保存,防止吸濕失效。
有效期:未開封有效期12個(gè)月,開蓋后2周內(nèi)用完。
特異性:特異性結(jié)合大鼠SS,與生長(zhǎng)激素、胰島素?zé)o交叉反應(yīng)。
重復(fù)性:板內(nèi)CV≤6.8%,板間CV≤8.8%,內(nèi)分泌調(diào)節(jié)因子檢測(cè)誤差小。
注意事項(xiàng):胰腺樣本需低溫處理,避免激素降解;杜絕樣本反復(fù)凍融。
實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備工作:
1. 試劑平衡與稀釋
試劑盒所有組分(酶標(biāo)板、標(biāo)準(zhǔn)品、酶結(jié)合物、底物、洗滌濃縮液、樣本稀釋液、終止液)從 2~8℃取出,室溫(20~25℃)放置平衡 30min,嚴(yán)禁直接低溫操作。
濃縮洗滌液配制:按標(biāo)簽標(biāo)注比例用去離子純水稀釋(常見 20× 濃縮液:1 份濃縮液 + 19 份純水),混勻備用,現(xiàn)配現(xiàn)用。
標(biāo)準(zhǔn)品復(fù)溶 / 梯度稀釋:
凍干標(biāo)準(zhǔn)品加入配套標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液充分溶解,室溫靜置 10min,輕柔吹打混勻;
按說明書梯度倍比稀釋出 5~7 個(gè)濃度梯度標(biāo)準(zhǔn)品,單獨(dú)標(biāo)記,剩余原液分裝 - 20℃避光保存,避免反復(fù)凍融。
待測(cè)樣本預(yù)處理:血清 / 血漿、組織勻漿、細(xì)胞上清用樣本稀釋液適當(dāng)稀釋,渾濁樣本 12000r/min 離心 10min 取上清;溶血、脂血嚴(yán)重樣本棄用。
2. 耗材與設(shè)備準(zhǔn)備
設(shè)備:恒溫 37℃孵育箱、酶標(biāo)儀(450nm 主波長(zhǎng),630nm 參比)、多通道移液槍、吸水濾紙、洗板機(jī)(或手動(dòng)洗板槽)、封板膜、離心管。
耗材無核酸酶、無熱源、無蛋白污染,移液槍提前校準(zhǔn)。
取出本次實(shí)驗(yàn)所需酶標(biāo)板條,剩余未使用板條裝入鋁箔密封袋,加干燥劑 2~8℃避光保存。
3. 孔位規(guī)劃標(biāo)記
酶標(biāo)板做好分區(qū)標(biāo)記:空白孔、零標(biāo)準(zhǔn)孔、梯度標(biāo)準(zhǔn)品孔、待測(cè)樣本孔、復(fù)孔(所有樣本、標(biāo)準(zhǔn)品建議設(shè)置雙復(fù)孔降低誤差)。
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實(shí)驗(yàn)操作流程:
試劑盒室溫放置 29min,稀釋洗滌液,梯度稀釋 SS 生長(zhǎng)抑素標(biāo)準(zhǔn)品,拆分酶標(biāo)板條并編號(hào),大鼠血漿樣本低溫稀釋處理。
標(biāo)準(zhǔn)孔加入 SS 標(biāo)準(zhǔn)稀釋液 50μL,樣本孔加入稀釋血漿樣本 50μL,空白孔補(bǔ)稀釋液 50μL,全部孔加入酶標(biāo)記抗體工作液 100μL,封板密封。
37℃避光孵育 59min,競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合固相抗體位點(diǎn)。
棄凈孔內(nèi)液體,洗滌液浸泡每孔 40s,甩干洗板 5 次,洗除非特異性吸附雜質(zhì)。
每孔加注顯色 A、B 液各 50μL,混勻后 37℃避光顯色 16min。
加入終止液 50μL 終止顯色反應(yīng),輕晃酶標(biāo)板混勻。
酶標(biāo)儀 450nm 讀取吸光度,換算樣本 SS 濃度。
關(guān)鍵字: 大鼠生長(zhǎng)抑素;SS;ELISA試劑盒;
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