本試劑盒基于雙抗體夾心ELISA檢測原理，酶標(biāo)板微孔內(nèi)固定大鼠血小板膜糖蛋白ⅡbⅢa(GP-ⅡbⅢa/CD41+CD61)特異性抗體，加入待測樣本后，樣本中的靶抗原與包被抗體特異性結(jié)合，再結(jié)合酶標(biāo)記配對(duì)抗體形成免疫夾心結(jié)構(gòu)，洗滌去除未結(jié)合物質(zhì)后進(jìn)行底物顯色，顯色強(qiáng)度與GP-ⅡbⅢa含量正相關(guān)，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線可精準(zhǔn)定量大鼠樣本中靶抗原含量。
基本參數(shù)?：
產(chǎn)品名稱：大鼠血小板膜糖蛋白ⅡbⅢa(GP-ⅡbⅢa/CD41+CD61)ELISA試劑盒
英文名稱：GP-ⅡbⅢa ELISA
貨號(hào)：Y-E1211
規(guī)格：48T/96T
靈敏度：最低檢測濃度0.09ng/mL
檢測范圍：0.25ng/mL - 50ng/mL
反應(yīng)時(shí)間：總反應(yīng)時(shí)長105分鐘
保存條件：2-8℃冷藏保存，板條密封防潮存放
有效期：未開封6個(gè)月，板條開封后1周內(nèi)用完
特異性：特異性識(shí)別大鼠GP-ⅡbⅢa復(fù)合蛋白，無其他膜糖蛋白交叉反應(yīng)
重復(fù)性：板內(nèi)變異系數(shù)≤5.5%，板間變異系數(shù)≤7.5%
注意事項(xiàng)：血小板樣本需輕柔處理，避免機(jī)械破損導(dǎo)致蛋白流失
通用注意事項(xiàng)：
樣本要求
血清、血漿避免嚴(yán)重溶血、脂血、黃疸；組織勻漿充分離心去除沉淀；樣本分裝凍存，反復(fù)凍融≥3 次會(huì)導(dǎo)致抗原降解，檢測值偏低。
溫度控制
孵育溫度嚴(yán)格 37℃，溫箱溫度波動(dòng)、室溫過低會(huì)降低結(jié)合效率，背景升高、重復(fù)性變差。
避光操作
TMB 底物、酶結(jié)合物、神經(jīng)遞質(zhì) / 維生素類靶標(biāo)樣本見光易氧化，顯色全程避光，試劑避光存放。
洗板規(guī)范
洗滌不充分會(huì)造成高背景、假陽性；拍干時(shí)使用干凈吸水紙，禁止交叉污染微孔。
污染防控
實(shí)驗(yàn)耗材無 DNase、RNase、蛋白酶；槍頭一次性更換，標(biāo)準(zhǔn)品與樣本避免交叉加樣；底物液變色、出現(xiàn)沉淀不可使用。
安全防護(hù)
終止液含稀硫酸，具有腐蝕性，避免接觸皮膚、黏膜；實(shí)驗(yàn)廢液集中收集中和后處理，不可直接傾倒。
失效判定
試劑盒超出有效期、試劑渾濁變色、標(biāo)準(zhǔn)品梯度無明顯顏色差異，均判定失效，禁止繼續(xù)實(shí)驗(yàn)。
稀釋校正
樣本 OD 值高于最高標(biāo)準(zhǔn)孔時(shí)，必須稀釋重測，最終結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)；低于最低檢測限標(biāo)注 “低于試劑盒靈敏度”。
空白對(duì)照
空白孔吸光度應(yīng)極低，若空白孔 OD＞0.1，說明洗滌不充分或試劑污染，實(shí)驗(yàn)作廢重做。
儲(chǔ)存禁忌
試劑盒不可冷凍結(jié)冰，冷凍會(huì)造成酶標(biāo)抗體蛋白變性，直接導(dǎo)致試劑盒完全失效。
實(shí)驗(yàn)步驟如下：
試劑盒室溫回溫 28min，配制洗滌工作液，梯度制備 GP-ⅡbⅢa 標(biāo)準(zhǔn)品，待測抗凝血漿樣本預(yù)處理。
標(biāo)記酶標(biāo)板孔型，空白孔加稀釋液，標(biāo)準(zhǔn)孔加梯度標(biāo)品，樣本孔加待測樣本，每孔加入一步法酶標(biāo)記物，密封封板。
37℃避光孵育 65min，保證抗原抗體充分結(jié)合。
棄去孔內(nèi)廢液，洗滌液浸泡微孔 35s，甩凈洗液，洗板 5 次，吸水紙拍干微孔。
加入顯色底物 A、B 液，震蕩混勻，37℃避光顯色 16min。
滴加終止液終止反應(yīng)，混勻板面溶液。
450nm 波長讀取 OD 值，計(jì)算樣本 GP-ⅡbⅢa 濃度。
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關(guān)鍵字： 大鼠血小板膜糖蛋白ⅡbⅢa;GP-ⅡbⅢa/CD41+CD61;ELISA試劑盒;
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