本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA檢測(cè)原理，酶標(biāo)板微孔預(yù)包被大鼠胰蛋白酶(trypsin)特異性抗體，待測(cè)樣本中的胰蛋白酶抗原可與固相抗體特異性結(jié)合，后續(xù)結(jié)合辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記抗體形成完整免疫復(fù)合物，洗滌去除游離雜質(zhì)后進(jìn)行酶促顯色，吸光度與胰蛋白酶含量正相關(guān)，通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線完成定量檢測(cè)。
基本參數(shù)?：
產(chǎn)品名稱：大鼠胰蛋白酶(trypsin)ELISA試劑盒
英文名稱：Rat trypsin ELISA Kit
貨號(hào)：Y-E1631
規(guī)格：48T/96T
靈敏度：最低檢測(cè)濃度0.08ng/mL
檢測(cè)范圍：0.25ng/mL - 42ng/mL
反應(yīng)時(shí)間：總反應(yīng)時(shí)長(zhǎng)95分鐘
保存條件：2-8℃避光保存，蛋白酶試劑低溫密封
有效期：未開封6個(gè)月，開封試劑1個(gè)月內(nèi)用完
特異性：特異性檢測(cè)大鼠胰蛋白酶，與胰凝乳蛋白酶無(wú)交叉反應(yīng)
重復(fù)性：板內(nèi)變異系數(shù)≤5.4%，板間變異系數(shù)≤7.4%
注意事項(xiàng)：胰腺樣本需快速滅活，避免蛋白酶自身降解，保證檢測(cè)準(zhǔn)確性
實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備工作：
1. 試劑平衡與稀釋
試劑盒所有組分（酶標(biāo)板、標(biāo)準(zhǔn)品、酶結(jié)合物、底物、洗滌濃縮液、樣本稀釋液、終止液）從 2~8℃取出，室溫（20~25℃）放置平衡 30min，嚴(yán)禁直接低溫操作。
濃縮洗滌液配制：按標(biāo)簽標(biāo)注比例用去離子純水稀釋（常見(jiàn) 20× 濃縮液：1 份濃縮液 + 19 份純水），混勻備用，現(xiàn)配現(xiàn)用。
標(biāo)準(zhǔn)品復(fù)溶 / 梯度稀釋：
凍干標(biāo)準(zhǔn)品加入配套標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液充分溶解，室溫靜置 10min，輕柔吹打混勻；
按說(shuō)明書梯度倍比稀釋出 5~7 個(gè)濃度梯度標(biāo)準(zhǔn)品，單獨(dú)標(biāo)記，剩余原液分裝 - 20℃避光保存，避免反復(fù)凍融。
待測(cè)樣本預(yù)處理：血清 / 血漿、組織勻漿、細(xì)胞上清用樣本稀釋液適當(dāng)稀釋，渾濁樣本 12000r/min 離心 10min 取上清；溶血、脂血嚴(yán)重樣本棄用。
2. 耗材與設(shè)備準(zhǔn)備
設(shè)備：恒溫 37℃孵育箱、酶標(biāo)儀（450nm 主波長(zhǎng)，630nm 參比）、多通道移液槍、吸水濾紙、洗板機(jī)（或手動(dòng)洗板槽）、封板膜、離心管。
耗材無(wú)核酸酶、無(wú)熱源、無(wú)蛋白污染，移液槍提前校準(zhǔn)。
取出本次實(shí)驗(yàn)所需酶標(biāo)板條，剩余未使用板條裝入鋁箔密封袋，加干燥劑 2~8℃避光保存。
3. 孔位規(guī)劃標(biāo)記
酶標(biāo)板做好分區(qū)標(biāo)記：空白孔、零標(biāo)準(zhǔn)孔、梯度標(biāo)準(zhǔn)品孔、待測(cè)樣本孔、復(fù)孔（所有樣本、標(biāo)準(zhǔn)品建議設(shè)置雙復(fù)孔降低誤差）。
實(shí)驗(yàn)步驟如下：
試劑盒室溫回溫 33min，稀釋濃縮洗滌液，梯度制備胰蛋白酶標(biāo)準(zhǔn)品，待測(cè)腸液 / 血清樣本低溫預(yù)處理。
標(biāo)記酶標(biāo)板孔位，空白、標(biāo)準(zhǔn)、樣本孔分別加注對(duì)應(yīng)液體，每孔加入一步法酶偶聯(lián)試劑，覆膜封板。
37℃避光孵育 68min，保證抗原充分結(jié)合包被抗體。
揭膜倒凈廢液，洗滌液浸泡微孔 35s，甩干，洗板 5 次，徹底拍干微孔內(nèi)洗液。
依次加入顯色 A 液、B 液，震蕩混勻，37℃避光顯色 18min。
加入終止液終止酶促反應(yīng)，搖勻酶標(biāo)板。
450nm 波長(zhǎng)檢測(cè)吸光度，標(biāo)準(zhǔn)曲線定量胰蛋白酶含量。
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關(guān)鍵字： 大鼠胰蛋白酶;trypsin;ELISA試劑盒;
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