本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA檢測(cè)技術(shù)，預(yù)先將大鼠PKB特異性單克隆抗體包被于酶標(biāo)板微孔中，加入標(biāo)準(zhǔn)品和待測(cè)大鼠組織、細(xì)胞樣本，樣本中的PKB抗原與固相抗體特異性結(jié)合，洗滌去除雜質(zhì)后加入酶標(biāo)記的PKB多克隆抗體，形成特異性免疫夾心復(fù)合物，經(jīng)充分洗滌后加入TMB底物顯色，顯色強(qiáng)度與樣本中PKB含量呈正相關(guān)，終止反應(yīng)后通過酶標(biāo)儀讀數(shù)，結(jié)合標(biāo)準(zhǔn)曲線實(shí)現(xiàn)精準(zhǔn)定量。
基本參數(shù)?：
產(chǎn)品名稱：大鼠蛋白激酶B(PKB)ELISA試劑盒
英文名稱：PKB ELISA Kit
貨號(hào)：Y-E1315
規(guī)格：48T/96T
靈敏度：最低檢測(cè)靈敏度≤0.8ng/mL
檢測(cè)范圍：1.5ng/mL - 50ng/mL
反應(yīng)時(shí)間：總反應(yīng)時(shí)長(zhǎng)110分鐘（抗體孵育80分鐘、顯色30分鐘）
保存條件：2-8℃避光保存，激酶抗體組分嚴(yán)禁高溫
有效期：未開封12個(gè)月，開封后密封保存30天
顯色系統(tǒng)：高穩(wěn)定性TMB顯色體系，適配激酶蛋白檢測(cè)
檢測(cè)波長(zhǎng)：450nm/630nm雙波長(zhǎng)校正
標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制：四參數(shù)Logistic回歸擬合標(biāo)準(zhǔn)曲線，R2≥0.990
特異性：特異性結(jié)合大鼠PKB，與其他蛋白激酶無交叉識(shí)別
重復(fù)性：板內(nèi)CV≤7%，板間CV≤9%
注意事項(xiàng)：組織樣本需充分裂解、離心取上清，雜質(zhì)會(huì)干擾結(jié)合反應(yīng)；全程低溫操作，防止激酶失活。
通用注意事項(xiàng)：
樣本要求
血清、血漿避免嚴(yán)重溶血、脂血、黃疸；組織勻漿充分離心去除沉淀；樣本分裝凍存，反復(fù)凍融≥3 次會(huì)導(dǎo)致抗原降解，檢測(cè)值偏低。
溫度控制
孵育溫度嚴(yán)格 37℃，溫箱溫度波動(dòng)、室溫過低會(huì)降低結(jié)合效率，背景升高、重復(fù)性變差。
避光操作
TMB 底物、酶結(jié)合物、神經(jīng)遞質(zhì) / 維生素類靶標(biāo)樣本見光易氧化，顯色全程避光，試劑避光存放。
洗板規(guī)范
洗滌不充分會(huì)造成高背景、假陽性；拍干時(shí)使用干凈吸水紙，禁止交叉污染微孔。
污染防控
實(shí)驗(yàn)耗材無 DNase、RNase、蛋白酶；槍頭一次性更換，標(biāo)準(zhǔn)品與樣本避免交叉加樣；底物液變色、出現(xiàn)沉淀不可使用。
安全防護(hù)
終止液含稀硫酸，具有腐蝕性，避免接觸皮膚、黏膜；實(shí)驗(yàn)廢液集中收集中和后處理，不可直接傾倒。
失效判定
試劑盒超出有效期、試劑渾濁變色、標(biāo)準(zhǔn)品梯度無明顯顏色差異，均判定失效，禁止繼續(xù)實(shí)驗(yàn)。
稀釋校正
樣本 OD 值高于最高標(biāo)準(zhǔn)孔時(shí)，必須稀釋重測(cè)，最終結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)；低于最低檢測(cè)限標(biāo)注 “低于試劑盒靈敏度”。
空白對(duì)照
空白孔吸光度應(yīng)極低，若空白孔 OD＞0.1，說明洗滌不充分或試劑污染，實(shí)驗(yàn)作廢重做。
儲(chǔ)存禁忌
試劑盒不可冷凍結(jié)冰，冷凍會(huì)造成酶標(biāo)抗體蛋白變性，直接導(dǎo)致試劑盒完全失效。
實(shí)驗(yàn)步驟如下：
試劑盒 4℃試劑提前 30min 取出復(fù)溫，洗滌液 1:20 稀釋，大鼠細(xì)胞裂解上清低溫保存。
酶標(biāo)板分孔加入 100μL 梯度 PKB 標(biāo)準(zhǔn)蛋白、細(xì)胞上清、空白液。
一步混合酶抗體液 100μL / 孔，密封 37℃孵育 90min。
洗滌液浸泡 35s，洗滌 5 次，徹底拍干微孔。
避光 TMB 顯色液 100μL，37℃避光顯色 16min。
滴加終止液充分混勻。
450nm 檢測(cè) OD 值，定量樣本 PKB 激酶含量。
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關(guān)鍵字： 大鼠蛋白激酶B;PKB;ELISA試劑盒;
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