本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附試驗原理，預(yù)先將純化的大鼠P-PKC特異性抗體包被于酶標(biāo)板微孔中，形成固相抗體，向微孔中加入標(biāo)準(zhǔn)品、待測大鼠樣本，樣本中的P-PKC抗原可與固相抗體特異性結(jié)合，洗滌去除未結(jié)合雜質(zhì)后，加入辣根過氧化物酶標(biāo)記的二抗，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體免疫復(fù)合物，再次洗滌后加入底物顯色液進行顯色反應(yīng)，在酸性終止液作用下終止反應(yīng)，最終通過酶標(biāo)儀測定特定波長下的吸光度值，吸光度值與樣本中P-PKC含量呈正相關(guān)，依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線即可精準(zhǔn)計算出樣本中P-PKC的濃度。
基本參數(shù)?：
產(chǎn)品名稱：大鼠磷酸化蛋白激酶C(P-PKC)ELISA試劑盒
英文名稱：P-PKC ELISA Kit
貨號：Y-E1142
規(guī)格：48T/96T
靈敏度：最低檢測濃度≤0.1ng/mL
檢測范圍：0.25ng/mL - 8ng/mL
反應(yīng)時間：總反應(yīng)時長120min（溫育兩步法）
保存條件：試劑盒未開封2-8℃冷藏保存，嚴(yán)禁冷凍；開封后試劑密封2-8℃存放
有效期：未開封有效期6個月
顯色系統(tǒng)：TMB雙組分顯色液，過氧化物酶催化顯色
檢測波長：450nm（主波長）、630nm（參比波長）
標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制：以標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)，對應(yīng)OD值為縱坐標(biāo)，繪制四參數(shù)擬合標(biāo)準(zhǔn)曲線，計算樣本濃度
特異性：與大鼠PKC、磷酸化同源蛋白無交叉反應(yīng)，與小鼠、兔同源蛋白交叉反應(yīng)率＜5%
重復(fù)性：板內(nèi)變異系數(shù)CV＜8%，板間變異系數(shù)CV＜10%
注意事項：全程避免高溫強光，磷酸化蛋白易降解，樣本需低溫快速處理；溫育溫度嚴(yán)格控制37℃，避免溫差影響結(jié)果；顯色時間需統(tǒng)一，避免過顯色或顯色不足
關(guān)鍵注意事項：
本試劑盒僅科研體外檢測，嚴(yán)禁臨床診斷使用。
全程避免試劑、板條強光直射，TMB 見光易失效。
移液器吸頭一次性使用，杜絕交叉污染；所有操作無酶、無熱源。
孵育溫度嚴(yán)格控制 37℃，溫度偏低會降低 OD 值、靈敏度下降。
洗板必須充分，殘液會造成非特異性結(jié)合，背景偏高。
終止后需快速讀數(shù)，放置過久吸光度會漂移，結(jié)果失真。
終止液含稀硫酸，避免接觸皮膚、眼睛，若不慎接觸大量清水沖洗。
實驗廢棄物按生物安全廢棄物規(guī)范處理。
不同批次試劑盒組分不可混用。
試劑盒運輸全程 2～8℃冷鏈，嚴(yán)禁高溫暴曬。
實驗步驟如下：
包被板每孔加入 50μL 梯度稀釋 P-PKC 標(biāo)準(zhǔn)品與待測樣本，空白孔加等量樣本稀釋液，封板膜封板。
每孔直接加入 100μL 酶標(biāo)檢測工作液，震蕩混勻 30 秒，37℃恒溫孵育 65min。
棄去孔內(nèi)全部液體，每孔注滿濃縮洗滌液靜置 20s 后拍干，重復(fù)洗板 4 次。
依次加入顯色 A 液 50μL、顯色 B 液 50μL，避光輕柔混勻，室溫顯色 18min。
每孔快速加入 50μL 終止液終止酶促反應(yīng)，輕晃微孔板混勻。
擦凈板底外壁水漬，酶標(biāo)儀設(shè)置 450nm 單波長讀取各孔 OD 吸光度數(shù)值。
依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品濃度與對應(yīng) OD 值繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，代入樣本 OD 計算樣本 P-PKC 實際濃度。
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關(guān)鍵字： 大鼠磷酸化蛋白激酶C;P-PKC;ELISA試劑盒;
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