本試劑盒采用競(jìng)爭(zhēng)抑制ELISA法檢測(cè)大鼠樣本中褪黑素含量。本試劑盒將褪黑素抗原包被于酶標(biāo)板，樣本中的MT與固相抗原競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合有限的酶標(biāo)記抗MT抗體，樣本中MT濃度越高，酶標(biāo)板上結(jié)合的酶活性越低，底物顯色越弱，通過測(cè)定各孔吸光度值，結(jié)合競(jìng)爭(zhēng)標(biāo)準(zhǔn)曲線，可精準(zhǔn)計(jì)算大鼠血清、腦組織等樣本中褪黑素的含量。
產(chǎn)品參數(shù)：
產(chǎn)品名稱 | 大鼠褪黑素(MT/MLT)ELISA試劑盒 | 貨號(hào) | Y-E1018 |
英文名稱 | MT/MLT ELISA Kit | 規(guī)格 | 48T/96T |
?靈敏度：最低檢測(cè)限0.05ng/mL，超高靈敏度檢測(cè)大鼠血清、松果體組織中褪黑素。
檢測(cè)范圍：0.1ng/mL - 4ng/mL，適配大鼠睡眠調(diào)節(jié)、內(nèi)分泌紊亂模型檢測(cè)。
反應(yīng)時(shí)間：全程85分鐘，快速孵育60分鐘，顯色25分鐘。
保存條件：激素試劑2-8℃嚴(yán)格避光冷藏，褪黑素易光解，禁止光照。
有效期：原裝有效期9個(gè)月，開封后密封避光保存20天內(nèi)有效。
特異性：專一識(shí)別大鼠褪黑素，與血清素、其他松果體激素?zé)o交叉反應(yīng)。
重復(fù)性：板內(nèi)CV≤4.2%，板間CV≤5.5%，內(nèi)分泌微量指標(biāo)檢測(cè)精度極高。
注意事項(xiàng)：全程避光操作，樣本采集后快速避光保存，避免褪黑素光降解。
實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備工作：
1. 試劑平衡與稀釋
試劑盒所有組分（酶標(biāo)板、標(biāo)準(zhǔn)品、酶結(jié)合物、底物、洗滌濃縮液、樣本稀釋液、終止液）從 2~8℃取出，室溫（20~25℃）放置平衡 30min，嚴(yán)禁直接低溫操作。
濃縮洗滌液配制：按標(biāo)簽標(biāo)注比例用去離子純水稀釋（常見 20× 濃縮液：1 份濃縮液 + 19 份純水），混勻備用，現(xiàn)配現(xiàn)用。
標(biāo)準(zhǔn)品復(fù)溶 / 梯度稀釋：
凍干標(biāo)準(zhǔn)品加入配套標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液充分溶解，室溫靜置 10min，輕柔吹打混勻；
按說明書梯度倍比稀釋出 5~7 個(gè)濃度梯度標(biāo)準(zhǔn)品，單獨(dú)標(biāo)記，剩余原液分裝 - 20℃避光保存，避免反復(fù)凍融。
待測(cè)樣本預(yù)處理：血清 / 血漿、組織勻漿、細(xì)胞上清用樣本稀釋液適當(dāng)稀釋，渾濁樣本 12000r/min 離心 10min 取上清；溶血、脂血嚴(yán)重樣本棄用。
2. 耗材與設(shè)備準(zhǔn)備
設(shè)備：恒溫 37℃孵育箱、酶標(biāo)儀（450nm 主波長(zhǎng)，630nm 參比）、多通道移液槍、吸水濾紙、洗板機(jī)（或手動(dòng)洗板槽）、封板膜、離心管。
耗材無核酸酶、無熱源、無蛋白污染，移液槍提前校準(zhǔn)。
取出本次實(shí)驗(yàn)所需酶標(biāo)板條，剩余未使用板條裝入鋁箔密封袋，加干燥劑 2~8℃避光保存。
3. 孔位規(guī)劃標(biāo)記
酶標(biāo)板做好分區(qū)標(biāo)記：空白孔、零標(biāo)準(zhǔn)孔、梯度標(biāo)準(zhǔn)品孔、待測(cè)樣本孔、復(fù)孔（所有樣本、標(biāo)準(zhǔn)品建議設(shè)置雙復(fù)孔降低誤差）。
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實(shí)驗(yàn)操作流程：
試劑盒室溫回溫 33min，稀釋濃縮洗滌液，梯度稀釋褪黑素標(biāo)準(zhǔn)品，拆分酶標(biāo)板條，未使用板條密封 2~8℃保存。
酶標(biāo)板分區(qū)標(biāo)記組別，標(biāo)準(zhǔn)品孔加入梯度標(biāo)準(zhǔn)品 50μL，待測(cè)樣本孔加入血清待測(cè)液 50μL，空白孔不加任何液體。
非空白孔加入酶標(biāo)記二抗工作液 100μL，封板膜封口，37℃避光孵育 74min。
撕掉封板，傾倒廢液，洗滌液加滿每孔浸泡 40s，吸水紙拍干，連續(xù)洗板 6 次。
每孔分別加入顯色 A 液、B 液 50μL，低速震蕩混勻，37℃避光顯色 20min。
每孔添加終止液 50μL，充分混勻終止酶促反應(yīng)。
酶標(biāo)儀 450nm 波長(zhǎng)檢測(cè) OD 值，計(jì)算樣本褪黑素 MT 濃度。
關(guān)鍵字： 大鼠褪黑素;MT/MLT;ELISA試劑盒;
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