本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附試驗原理,預先將純化的大鼠DHEA-S抗體包被于酶標板微孔內,形成固相抗體。檢測時,樣本、標準品中的DHEA-S可與固相抗體特異性結合,再加入酶標記檢測抗體,形成固相抗體-抗原-酶標抗體的免疫復合物。經充分孵育洗滌后,加入底物液進行顯色反應,底物在結合酶的催化下生成有色產物,產物顏色深淺與樣本中DHEA-S含量呈正相關,最后通過酶標儀測定吸光度值,結合標準曲線即可精準計算樣本中大鼠DHEA-S的濃度。
產品參數(shù):
產品名稱 | 大鼠脫氫表雄酮硫酸酯(DHEA-S)ELISA試劑盒 | 貨號 | Y-E1612 |
英文名稱 | DHEA-S ELISA Kit | 規(guī)格 | 48T/96T |
?靈敏度:最低檢測濃度≤0.1ng/mL
檢測范圍:0.2ng/mL - 8ng/mL
反應時間:整體實驗操作時長90分鐘,溫育分兩步,分別為30分鐘、60分鐘
保存條件:試劑盒未開封2-8℃冷藏保存,濃縮洗滌液可室溫避光保存,嚴禁冷凍
有效期:未開封原裝試劑盒有效期6個月,開封后配套試劑1個月內用完
特異性:僅特異性識別大鼠DHEA-S,與人體、小鼠同源交叉物質交叉反應率<5%,無其他類固醇激素交叉反應
重復性:板內變異系數(shù)CV≤6%,板間變異系數(shù)CV≤8%,實驗重復性良好
注意事項:樣本需避免溶血、脂血,血清樣本采集后需低溫離心分離;溫育過程需嚴格避光,避免強光直射影響酶促反應;試劑使用前需充分混勻,禁止混用不同批次試劑盒試劑。
試劑盒組成:
預包被抗體/抗原微孔板 96孔/48孔 固定捕獲抗體/抗原,結合目標物
標準品 6支/套 制備標準曲線,定量檢測依據(jù)
生物素標記抗體/抗原 1瓶 識別并結合目標物,提供酶結合位點
辣根過氧化物酶(HRP)標記親和素 1瓶 與生物素結合,催化底物顯色
底物溶液A、B 各1瓶 混合后作為酶促反應底物,產生顏色變化
終止液 1瓶 終止酶促反應,穩(wěn)定顯色結果
濃縮洗滌液 1瓶 清洗微孔板,去除未結合物質
封板膜 2張 孵育過程中防止污染和揮發(fā)
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實驗操作流程:
包被板條提前室溫平衡 30min,設置空白孔、標準品孔、待測樣品孔,每孔加入對應濃度 DHEA-S 標準品、稀釋后待測樣本,空白孔加等量樣本稀釋液,每孔加樣量 50μL。
所有孔內即刻加入酶標記結合液 50μL,封板膜密封酶標板,37℃恒溫孵育 60min。
揭去封板膜,棄去孔內全部液體,每孔加滿洗滌工作液,靜置 30s 后甩干,重復洗板操作 5 次,最后一次拍凈孔內殘留液體。
每孔依次加入顯色液 A 液 50μL、顯色液 B 液 50μL,輕柔震蕩酶標板混勻,避光 37℃顯色 15min。
顯色結束后快速向每孔加入終止液 50μL,輕微晃動板板終止酶促顯色反應。
10min 內使用酶標儀設定 450nm 波長,依次讀取各孔 OD 吸光度數(shù)值。
根據(jù)標準品濃度與對應 OD 值繪制標準曲線,代入樣品 OD 值計算樣本中 DHEA-S 實際濃度。
關鍵字: 大鼠脫氫表雄酮硫酸酯;DHEA-S;ELISA試劑盒;
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