本試劑盒基于雙抗體夾心ELISA技術(shù)原理，微孔板預(yù)先包被抗人FRA特異性抗體，可特異性捕獲樣本與標(biāo)準(zhǔn)品中的FRA抗原，經(jīng)孵育結(jié)合、洗滌去除游離雜質(zhì)后，加入HRP標(biāo)記的FRA配對(duì)檢測(cè)抗體，形成固相抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，底物顯色后終止反應(yīng)，檢測(cè)各孔吸光度，OD值與樣本中FRA含量成正比，通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線即可精準(zhǔn)測(cè)算FRA濃度。
產(chǎn)品參數(shù)：

?靈敏度：0.22ng/mL

檢測(cè)范圍：0.45-28.8ng/mL

反應(yīng)時(shí)間：室溫孵育 100min，酶結(jié)合物 62min，顯色 19min

保存條件：2～8℃避光存放，顯色液 A、B 分開避光存放

顯色系統(tǒng)：A 液緩沖基質(zhì)，B 液顯色底物，混合后啟動(dòng)顯色

檢測(cè)波長(zhǎng)：450nm 單波長(zhǎng)檢測(cè)

標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制：濃度與 OD 值線性擬合，帶入方程換算待測(cè)濃度

注意事項(xiàng)：耗材需一次性使用，槍頭不可重復(fù)吸取試劑，防止交叉污染
通用注意事項(xiàng)：

樣本要求

血清、血漿避免嚴(yán)重溶血、脂血、黃疸；組織勻漿充分離心去除沉淀；樣本分裝凍存，反復(fù)凍融≥3 次會(huì)導(dǎo)致抗原降解，檢測(cè)值偏低。

溫度控制

孵育溫度嚴(yán)格 37℃，溫箱溫度波動(dòng)、室溫過(guò)低會(huì)降低結(jié)合效率，背景升高、重復(fù)性變差。

避光操作

TMB 底物、酶結(jié)合物、神經(jīng)遞質(zhì) / 維生素類靶標(biāo)樣本見光易氧化，顯色全程避光，試劑避光存放。

洗板規(guī)范

洗滌不充分會(huì)造成高背景、假陽(yáng)性；拍干時(shí)使用干凈吸水紙，禁止交叉污染微孔。

污染防控

實(shí)驗(yàn)耗材無(wú) DNase、RNase、蛋白酶；槍頭一次性更換，標(biāo)準(zhǔn)品與樣本避免交叉加樣；底物液變色、出現(xiàn)沉淀不可使用。

安全防護(hù)

終止液含稀硫酸，具有腐蝕性，避免接觸皮膚、黏膜；實(shí)驗(yàn)廢液集中收集中和后處理，不可直接傾倒。

失效判定

試劑盒超出有效期、試劑渾濁變色、標(biāo)準(zhǔn)品梯度無(wú)明顯顏色差異，均判定失效，禁止繼續(xù)實(shí)驗(yàn)。

稀釋校正

樣本 OD 值高于最高標(biāo)準(zhǔn)孔時(shí)，必須稀釋重測(cè)，最終結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)；低于最低檢測(cè)限標(biāo)注 “低于試劑盒靈敏度”。

空白對(duì)照

空白孔吸光度應(yīng)極低，若空白孔 OD＞0.1，說(shuō)明洗滌不充分或試劑污染，實(shí)驗(yàn)作廢重做。

儲(chǔ)存禁忌

試劑盒不可冷凍結(jié)冰，冷凍會(huì)造成酶標(biāo)抗體蛋白變性，直接導(dǎo)致試劑盒完全失效。

公司正在出售的產(chǎn)品：

實(shí)驗(yàn)操作流程：

試劑盒室溫平衡 30min，配制一步法酶結(jié)合工作液，區(qū)分空白、標(biāo)準(zhǔn)、待測(cè)孔。

每孔先加酶工作液 55μL，標(biāo)準(zhǔn)孔加梯度 FRA 標(biāo)準(zhǔn)液 45μL，樣本孔加待測(cè)上清 45μL，空白孔補(bǔ)緩沖液。

覆膜密封，37℃孵育 63min，倒掉廢液，洗板 6 次，每次浸泡 30s，倒扣拍干。

每孔加入 TMB 顯色液 100μL 混勻。

避光 37℃顯色 19min。

滴加終止液 50μL 終止顯色。

酶標(biāo)儀 450nm 讀數(shù)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線定量 FRA。