本試劑盒依托經(jīng)典雙抗體夾心ELISA技術(shù)，微孔板固定抗人ANF特異性抗體，加入不同濃度標(biāo)準(zhǔn)品和待測(cè)生物樣本，樣本中的ANF抗原與固相抗體特異性結(jié)合，孵育結(jié)束后洗滌去除未結(jié)合物質(zhì)，加入HRP標(biāo)記的ANF配對(duì)抗體完成夾心結(jié)合，經(jīng)底物顯色、終止反應(yīng)后檢測(cè)吸光度，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線線性關(guān)系定量檢測(cè)樣本中ANF的含量。
產(chǎn)品參數(shù)：

?靈敏度：1.5pg/mL

檢測(cè)范圍：3.12~200pg/mL

反應(yīng)時(shí)間：樣本孵育 98min，酶標(biāo)記二抗 63min，顯色 17min

保存條件：2～8℃避光，多肽標(biāo)準(zhǔn)品避免反復(fù)凍融

顯色系統(tǒng)：HRP 催化 TMB 顯色，終止后顏色穩(wěn)定 30min

檢測(cè)波長(zhǎng)：450nm，650nm 扣除背景

標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制：四參數(shù) Logistic 擬合標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣本 pg 級(jí)濃度

注意事項(xiàng)：采血時(shí)患者不可劇烈活動(dòng)，體位需平躺 30min 后取樣，體位會(huì)顯著影響 ANF 分泌水平
實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備工作：

1. 試劑平衡與稀釋

試劑盒所有組分（酶標(biāo)板、標(biāo)準(zhǔn)品、酶結(jié)合物、底物、洗滌濃縮液、樣本稀釋液、終止液）從 2~8℃取出，室溫（20~25℃）放置平衡 30min，嚴(yán)禁直接低溫操作。

濃縮洗滌液配制：按標(biāo)簽標(biāo)注比例用去離子純水稀釋（常見(jiàn) 20× 濃縮液：1 份濃縮液 + 19 份純水），混勻備用，現(xiàn)配現(xiàn)用。

標(biāo)準(zhǔn)品復(fù)溶 / 梯度稀釋：

凍干標(biāo)準(zhǔn)品加入配套標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液充分溶解，室溫靜置 10min，輕柔吹打混勻；

按說(shuō)明書(shū)梯度倍比稀釋出 5~7 個(gè)濃度梯度標(biāo)準(zhǔn)品，單獨(dú)標(biāo)記，剩余原液分裝 - 20℃避光保存，避免反復(fù)凍融。

待測(cè)樣本預(yù)處理：血清 / 血漿、組織勻漿、細(xì)胞上清用樣本稀釋液適當(dāng)稀釋，渾濁樣本 12000r/min 離心 10min 取上清；溶血、脂血嚴(yán)重樣本棄用。

2. 耗材與設(shè)備準(zhǔn)備

設(shè)備：恒溫 37℃孵育箱、酶標(biāo)儀（450nm 主波長(zhǎng)，630nm 參比）、多通道移液槍、吸水濾紙、洗板機(jī)（或手動(dòng)洗板槽）、封板膜、離心管。

耗材無(wú)核酸酶、無(wú)熱源、無(wú)蛋白污染，移液槍提前校準(zhǔn)。

取出本次實(shí)驗(yàn)所需酶標(biāo)板條，剩余未使用板條裝入鋁箔密封袋，加干燥劑 2~8℃避光保存。

3. 孔位規(guī)劃標(biāo)記

酶標(biāo)板做好分區(qū)標(biāo)記：空白孔、零標(biāo)準(zhǔn)孔、梯度標(biāo)準(zhǔn)品孔、待測(cè)樣本孔、復(fù)孔（所有樣本、標(biāo)準(zhǔn)品建議設(shè)置雙復(fù)孔降低誤差）。

公司正在出售的產(chǎn)品：

實(shí)驗(yàn)操作流程：

試劑盒常溫靜置 26min 回溫，稀釋一步法酶標(biāo)二抗工作液，標(biāo)記空白、標(biāo)準(zhǔn)、樣品孔。

各孔先加酶結(jié)合液 50μL，標(biāo)準(zhǔn)孔加梯度 ANF 標(biāo)準(zhǔn)液 50μL，待測(cè)孔加血清樣本 50μL，空白孔補(bǔ)稀釋緩沖液。

密封微孔板，37℃孵育 73min，棄液后洗板 5 次，每次浸泡 33s，徹底拍干孔板。

依次添加顯色 A、B 液各 50μL，輕柔混勻。

避光 37℃顯色 16min。

滴加終止液 50μL 終止顯色。

450nm 檢測(cè) OD，換算心納素樣本濃度。