本試劑盒依托雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)原理，微孔板固定人水蛭素(HRD)特異性抗體，待測樣本、標(biāo)準(zhǔn)品中的HRD抗原與固相抗體特異性免疫結(jié)合，孵育洗滌后加入酶標(biāo)記檢測抗體，構(gòu)建穩(wěn)定的免疫夾心復(fù)合物，經(jīng)TMB底物顯色、終止反應(yīng)后，酶標(biāo)儀檢測吸光度，吸光度值與樣本中HRD濃度成正比，結(jié)合標(biāo)準(zhǔn)曲線精準(zhǔn)定量靶標(biāo)含量。
基本參數(shù)?：
產(chǎn)品名稱：人水蛭素(HRD)ELISA試劑盒
英文名稱：HRD ELISA Kit
貨號(hào)：Y-E2677
規(guī)格：48T/96T
靈敏度：最小檢出 0.05IU/mL
檢測范圍：0.2IU/mL ~ 25IU/mL
反應(yīng)時(shí)間：室溫孵育 77min，酶標(biāo)記二抗 50min，避光顯色 17min，總用時(shí) 2h24min
保存條件：試劑盒主體 2～8℃，終止液常溫密閉，濃縮洗滌液結(jié)晶溫水浴溶解
顯色系統(tǒng)：雙組份配比顯色體系，1N 硫酸終止反應(yīng)
檢測波長：450nm 搭配 620nm 雙波長讀數(shù)
標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制：五參數(shù) Logistic 擬合標(biāo)準(zhǔn)曲線，7 個(gè) IU 濃度梯度
注意事項(xiàng)：抗凝血漿樣本優(yōu)先檢測，血清樣本凝血后水蛭素含量下降；嚴(yán)格把控顯色時(shí)間
實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備工作：
1. 試劑平衡與稀釋
試劑盒所有組分（酶標(biāo)板、標(biāo)準(zhǔn)品、酶結(jié)合物、底物、洗滌濃縮液、樣本稀釋液、終止液）從 2~8℃取出，室溫（20~25℃）放置平衡 30min，嚴(yán)禁直接低溫操作。
濃縮洗滌液配制：按標(biāo)簽標(biāo)注比例用去離子純水稀釋（常見 20× 濃縮液：1 份濃縮液 + 19 份純水），混勻備用，現(xiàn)配現(xiàn)用。
標(biāo)準(zhǔn)品復(fù)溶 / 梯度稀釋：
凍干標(biāo)準(zhǔn)品加入配套標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液充分溶解，室溫靜置 10min，輕柔吹打混勻；
按說明書梯度倍比稀釋出 5~7 個(gè)濃度梯度標(biāo)準(zhǔn)品，單獨(dú)標(biāo)記，剩余原液分裝 - 20℃避光保存，避免反復(fù)凍融。
待測樣本預(yù)處理：血清 / 血漿、組織勻漿、細(xì)胞上清用樣本稀釋液適當(dāng)稀釋，渾濁樣本 12000r/min 離心 10min 取上清；溶血、脂血嚴(yán)重樣本棄用。
2. 耗材與設(shè)備準(zhǔn)備
設(shè)備：恒溫 37℃孵育箱、酶標(biāo)儀（450nm 主波長，630nm 參比）、多通道移液槍、吸水濾紙、洗板機(jī)（或手動(dòng)洗板槽）、封板膜、離心管。
耗材無核酸酶、無熱源、無蛋白污染，移液槍提前校準(zhǔn)。
取出本次實(shí)驗(yàn)所需酶標(biāo)板條，剩余未使用板條裝入鋁箔密封袋，加干燥劑 2~8℃避光保存。
3. 孔位規(guī)劃標(biāo)記
酶標(biāo)板做好分區(qū)標(biāo)記：空白孔、零標(biāo)準(zhǔn)孔、梯度標(biāo)準(zhǔn)品孔、待測樣本孔、復(fù)孔（所有樣本、標(biāo)準(zhǔn)品建議設(shè)置雙復(fù)孔降低誤差）。
實(shí)驗(yàn)步驟如下：
試劑室溫靜置 27min，配制洗滌工作液，倍比稀釋 HRD 標(biāo)準(zhǔn)品，標(biāo)記酶標(biāo)板孔類型。
標(biāo)準(zhǔn)孔添加 50μL 梯度標(biāo)準(zhǔn)品；樣本孔加 50μL 稀釋液 + 10μL 待測樣本；空白孔空置不加液。
非空白孔加入酶偶聯(lián)特異性抗體 100μL，封板密封，37℃孵育 60min。
撕去封板膜，洗滌液加滿每孔靜置 35s，甩干洗板 5 次，充分拍干板條。
顯色 A、B 液各 50μL 加入每孔，震蕩混勻，避光顯色 16min。
滴加 50μL 終止液混勻終止反應(yīng)。
酶標(biāo)儀 450nm 讀數(shù)，換算樣本水蛭素 HRD 含量。
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