本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA檢測(cè)原理，微孔板固相包被人水閘蛋白14(CLDN14)特異性抗體，加入待測(cè)樣本與梯度標(biāo)準(zhǔn)品，樣本中的CLDN14抗原與固相抗體特異性結(jié)合，洗滌去除游離雜質(zhì)后加入酶標(biāo)記配對(duì)抗體，形成夾心免疫復(fù)合物，底物顯色終止后測(cè)定吸光度，數(shù)值與樣本中CLDN14蛋白含量呈線性正相關(guān)，可完成樣本靶標(biāo)的定量檢測(cè)。
基本參數(shù)?：
產(chǎn)品名稱：人水閘蛋白14(CLDN14)ELISA試劑盒
英文名稱：CLDN14 ELISA Kit
貨號(hào)：Y-E2948
規(guī)格：48T/96T
靈敏度：檢出下限 0.54ng/mL
檢測(cè)范圍：3.2ng/mL ~ 890ng/mL
反應(yīng)時(shí)間：37℃孵育 83min，二抗結(jié)合 54min，底物顯色 20min，總時(shí)長(zhǎng) 2h37min
保存條件：2~8℃避光存放整套試劑盒，干粉標(biāo)準(zhǔn)品 - 20℃長(zhǎng)期保存，復(fù)溶后 24h 內(nèi)用完
顯色系統(tǒng)：即用型 TMB 顯色底物，2mol/L 硫酸終止
檢測(cè)波長(zhǎng)：450nm 主波長(zhǎng)，630nm 參比波長(zhǎng)
標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制：半對(duì)數(shù)線性擬合，6 個(gè)標(biāo)準(zhǔn)稀釋梯度
注意事項(xiàng)：腎小管上皮細(xì)胞上清樣本需過濾雜質(zhì)；加樣不可溢出孔外造成孔間串色
通用注意事項(xiàng)：
樣本要求
血清、血漿避免嚴(yán)重溶血、脂血、黃疸；組織勻漿充分離心去除沉淀；樣本分裝凍存，反復(fù)凍融≥3 次會(huì)導(dǎo)致抗原降解，檢測(cè)值偏低。
溫度控制
孵育溫度嚴(yán)格 37℃，溫箱溫度波動(dòng)、室溫過低會(huì)降低結(jié)合效率，背景升高、重復(fù)性變差。
避光操作
TMB 底物、酶結(jié)合物、神經(jīng)遞質(zhì) / 維生素類靶標(biāo)樣本見光易氧化，顯色全程避光，試劑避光存放。
洗板規(guī)范
洗滌不充分會(huì)造成高背景、假陽性；拍干時(shí)使用干凈吸水紙，禁止交叉污染微孔。
污染防控
實(shí)驗(yàn)耗材無 DNase、RNase、蛋白酶；槍頭一次性更換，標(biāo)準(zhǔn)品與樣本避免交叉加樣；底物液變色、出現(xiàn)沉淀不可使用。
安全防護(hù)
終止液含稀硫酸，具有腐蝕性，避免接觸皮膚、黏膜；實(shí)驗(yàn)廢液集中收集中和后處理，不可直接傾倒。
失效判定
試劑盒超出有效期、試劑渾濁變色、標(biāo)準(zhǔn)品梯度無明顯顏色差異，均判定失效，禁止繼續(xù)實(shí)驗(yàn)。
稀釋校正
樣本 OD 值高于最高標(biāo)準(zhǔn)孔時(shí)，必須稀釋重測(cè)，最終結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)；低于最低檢測(cè)限標(biāo)注 “低于試劑盒靈敏度”。
空白對(duì)照
空白孔吸光度應(yīng)極低，若空白孔 OD＞0.1，說明洗滌不充分或試劑污染，實(shí)驗(yàn)作廢重做。
儲(chǔ)存禁忌
試劑盒不可冷凍結(jié)冰，冷凍會(huì)造成酶標(biāo)抗體蛋白變性，直接導(dǎo)致試劑盒完全失效。
實(shí)驗(yàn)步驟如下：
試劑盒所有試劑室溫平衡 32min，稀釋洗滌緩沖液，逐級(jí)配制 CLDN14 標(biāo)準(zhǔn)品梯度液，密封未使用板條。
標(biāo)準(zhǔn)品孔加 50μL 不同濃度 CLDN14 標(biāo)準(zhǔn)溶液；樣本孔加 45μL 稀釋液 + 15μL 待測(cè)樣本；空白孔不加試劑。
除空白孔外每孔加入 HRP 標(biāo)記抗 CLDN14 抗體 100μL，封板 37℃孵育 69min。
棄液洗板，洗滌液浸泡每孔 37s 甩干，重復(fù)洗板 5 次，拍干微孔板殘留液體。
每孔加入顯色底物 A、B 液各 50μL，輕震混勻，37℃避光顯色 18min。
加入終止液 50μL 混勻終止酶促顯色反應(yīng)。
450nm 波長(zhǎng)測(cè)定吸光度，標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算 CLDN14 濃度。
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關(guān)鍵字： 人水閘蛋白14;CLDN14;ELISA試劑盒;
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