本試劑盒采用經(jīng)典雙抗體夾心酶聯(lián)免疫檢測(cè)原理，微孔板孔壁包被純化的抗人TP特異性抗體，加入不同濃度標(biāo)準(zhǔn)品及待測(cè)樣本，樣本中的TP抗原與固相抗體特異性結(jié)合，孵育充分反應(yīng)后洗滌除雜，加入辣根過氧化物酶標(biāo)記的TP檢測(cè)抗體，形成穩(wěn)定的免疫復(fù)合物，底物顯色終止后檢測(cè)OD值，結(jié)合標(biāo)準(zhǔn)曲線定量分析樣本中TP的含量。
產(chǎn)品參數(shù)：

?靈敏度：0.13ng/mL

檢測(cè)范圍：0.26-16.64ng/mL

反應(yīng)時(shí)間：樣本孵育 83min，酶標(biāo)二抗 52min，顯色 14min

保存條件：未開封 2-8℃，稀釋后洗滌液常溫可放置 1 周

顯色系統(tǒng)：經(jīng)典 HRP-TMB 顯色體系

檢測(cè)波長(zhǎng)：450nm 單波長(zhǎng)檢測(cè)

標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制：線性擬合標(biāo)準(zhǔn)曲線用于樣本定量

注意事項(xiàng)：腫瘤組織勻漿務(wù)必去除壞死組織，壞死碎片會(huì)造成非特異性吸附
通用注意事項(xiàng)：

樣本要求

血清、血漿避免嚴(yán)重溶血、脂血、黃疸；組織勻漿充分離心去除沉淀；樣本分裝凍存，反復(fù)凍融≥3 次會(huì)導(dǎo)致抗原降解，檢測(cè)值偏低。

溫度控制

孵育溫度嚴(yán)格 37℃，溫箱溫度波動(dòng)、室溫過低會(huì)降低結(jié)合效率，背景升高、重復(fù)性變差。

避光操作

TMB 底物、酶結(jié)合物、神經(jīng)遞質(zhì) / 維生素類靶標(biāo)樣本見光易氧化，顯色全程避光，試劑避光存放。

洗板規(guī)范

洗滌不充分會(huì)造成高背景、假陽(yáng)性；拍干時(shí)使用干凈吸水紙，禁止交叉污染微孔。

污染防控

實(shí)驗(yàn)耗材無(wú) DNase、RNase、蛋白酶；槍頭一次性更換，標(biāo)準(zhǔn)品與樣本避免交叉加樣；底物液變色、出現(xiàn)沉淀不可使用。

安全防護(hù)

終止液含稀硫酸，具有腐蝕性，避免接觸皮膚、黏膜；實(shí)驗(yàn)廢液集中收集中和后處理，不可直接傾倒。

失效判定

試劑盒超出有效期、試劑渾濁變色、標(biāo)準(zhǔn)品梯度無(wú)明顯顏色差異，均判定失效，禁止繼續(xù)實(shí)驗(yàn)。

稀釋校正

樣本 OD 值高于最高標(biāo)準(zhǔn)孔時(shí)，必須稀釋重測(cè)，最終結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)；低于最低檢測(cè)限標(biāo)注 “低于試劑盒靈敏度”。

空白對(duì)照

空白孔吸光度應(yīng)極低，若空白孔 OD＞0.1，說明洗滌不充分或試劑污染，實(shí)驗(yàn)作廢重做。

儲(chǔ)存禁忌

試劑盒不可冷凍結(jié)冰，冷凍會(huì)造成酶標(biāo)抗體蛋白變性，直接導(dǎo)致試劑盒完全失效。

公司正在出售的產(chǎn)品：

實(shí)驗(yàn)操作流程：

試劑盒室溫平衡 33min，配置一步法雙夾心酶工作液，劃分空白、標(biāo)準(zhǔn)、樣品孔。

每孔先加酶混合液 60μL，標(biāo)品孔加梯度 TP 標(biāo)準(zhǔn)品 40μL，樣品孔加腫瘤組織勻漿 40μL，空白孔加稀釋液 40μL。

覆膜密封，37℃孵育 57min，倒掉廢液，洗板 4 次，每次浸泡 25s，拍干微孔板。

每孔加入 TMB 顯色底物 100μL 混勻。

室溫避光顯色 11min。

滴加終止液 50μL 終止顯色。

450nm 測(cè)吸光度，計(jì)算 TP 酶蛋白濃度。