本試劑盒基于雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附原理，將抗人脂多糖特異性抗體包被于酶標(biāo)板微孔作為固相載體，加入不同濃度標(biāo)準(zhǔn)品和待測樣本后，樣本中的LPS與固相抗體特異性結(jié)合，孵育洗滌后加入HRP標(biāo)記的LPS檢測抗體，構(gòu)建免疫夾心復(fù)合物，經(jīng)顯色反應(yīng)后，依據(jù)OD值與LPS濃度的線性關(guān)系，結(jié)合標(biāo)準(zhǔn)曲線定量檢測樣本中內(nèi)毒素的含量。
基本參數(shù)?：
產(chǎn)品名稱：人脂多糖/內(nèi)毒素(LPS)ELISA試劑盒
英文名稱：LPS Elisa Kit
貨號：Y-E785
規(guī)格：48T/96T
靈敏度：檢出下限 0.03EU/mL
檢測范圍：0.06EU/mL - 3.84EU/mL
反應(yīng)時間：室溫結(jié)合 52min，酶孵育 42min，顯色 14min
保存條件：試劑盒 2-8℃，避免環(huán)境熱源導(dǎo)致內(nèi)毒素試劑降解
顯色系統(tǒng)：單組份 TMB 穩(wěn)定顯色底物
檢測波長：450nm 參比 650nm
標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制：四參數(shù)擬合標(biāo)準(zhǔn)曲線，嚴(yán)格設(shè)置陰性空白對照
注意事項：所有耗材必須無熱原，槍頭、離心管需去內(nèi)毒素處理
通用注意事項：
樣本要求
血清、血漿避免嚴(yán)重溶血、脂血、黃疸；組織勻漿充分離心去除沉淀；樣本分裝凍存，反復(fù)凍融≥3 次會導(dǎo)致抗原降解，檢測值偏低。
溫度控制
孵育溫度嚴(yán)格 37℃，溫箱溫度波動、室溫過低會降低結(jié)合效率，背景升高、重復(fù)性變差。
避光操作
TMB 底物、酶結(jié)合物、神經(jīng)遞質(zhì) / 維生素類靶標(biāo)樣本見光易氧化，顯色全程避光，試劑避光存放。
洗板規(guī)范
洗滌不充分會造成高背景、假陽性；拍干時使用干凈吸水紙，禁止交叉污染微孔。
污染防控
實驗耗材無 DNase、RNase、蛋白酶；槍頭一次性更換，標(biāo)準(zhǔn)品與樣本避免交叉加樣；底物液變色、出現(xiàn)沉淀不可使用。
安全防護(hù)
終止液含稀硫酸，具有腐蝕性，避免接觸皮膚、黏膜；實驗廢液集中收集中和后處理，不可直接傾倒。
失效判定
試劑盒超出有效期、試劑渾濁變色、標(biāo)準(zhǔn)品梯度無明顯顏色差異，均判定失效，禁止繼續(xù)實驗。
稀釋校正
樣本 OD 值高于最高標(biāo)準(zhǔn)孔時，必須稀釋重測，最終結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)；低于最低檢測限標(biāo)注 “低于試劑盒靈敏度”。
空白對照
空白孔吸光度應(yīng)極低，若空白孔 OD＞0.1，說明洗滌不充分或試劑污染，實驗作廢重做。
儲存禁忌
試劑盒不可冷凍結(jié)冰，冷凍會造成酶標(biāo)抗體蛋白變性，直接導(dǎo)致試劑盒完全失效。
實驗步驟如下：
試劑盒無熱源環(huán)境室溫平衡 35min，無熱源稀釋 LPS 標(biāo)準(zhǔn)品，血清樣本無熱源預(yù)處理稀釋，標(biāo)記酶標(biāo)板微孔。
無熱源槍頭加樣，空白孔加無熱源稀釋液，標(biāo)準(zhǔn)孔加梯度 LPS 標(biāo)準(zhǔn)品，樣本孔加待測血清。
一步法直接添加無熱源酶標(biāo)記抗體工作液，輕晃酶板混勻，全程避免外源內(nèi)毒素污染。
無熱源封板密封，37℃避光孵育 65min，孵育箱提前除熱源。
廢液棄去，無熱源洗板液洗板 6 次，每次浸泡 30s，拍干微孔殘留洗液。
避光無熱源環(huán)境添加顯色底物，室溫顯色 16min，嚴(yán)格把控顯色時長。
終止液終止反應(yīng)，450nm 讀取 OD 值，計算樣本內(nèi)毒素 LPS 濃度。
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關(guān)鍵字： 人脂多糖/內(nèi)毒素;LPS;ELISA試劑盒;
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