本試劑盒依托雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附原理，固相酶標板固定大鼠visfatin特異性抗體，樣本與標準品中的visfatin抗原特異性結合于固相抗體，加入酶標記檢測抗體形成夾心免疫復合物，顯色反應后檢測吸光度，通過標準曲線測定大鼠樣本中visfatin的表達水平。
基本參數(shù)?：

產品名稱：大鼠內脂素/內臟脂肪素(visfatin)ELISA試劑盒

英文名稱：Rat visfatin ELISA Kit
貨號：Y-E1169

規(guī)格：48T/96T

靈敏度：最低檢測下限≤0.06ng/mL，可精準檢出大鼠血清、脂肪組織中微量visfatin表達。

檢測范圍：0.08ng/mL - 12ng/mL，覆蓋大鼠代謝紊亂、炎癥模型樣本的visfatin檢測區(qū)間。

反應時間：全程實驗時長90分鐘，樣本孵育30min、酶結合物孵育30min、顯色15min、終止穩(wěn)定15min。

保存條件：試劑盒整體2-8℃避光冷藏，標準品、抗體濃縮液單獨密封保存，嚴禁冷凍。

有效期：未開封原裝有效期6個月，開封后1個月內使用完畢。

顯色系統(tǒng)：TMB穩(wěn)定顯色體系，顯色均勻、梯度清晰，無背景雜色干擾。

檢測波長：檢測波長450nm，參比波長600nm，雙波長校正提升檢測準確度。

標準曲線繪制：四參數(shù)Logistic擬合標準曲線，R2≥0.992，高低濃度樣本定量準確。

特異性：專一結合大鼠visfatin，與脂聯(lián)素、瘦素等脂肪因子無交叉反應，特異性良好。

重復性：板內變異系數(shù)≤8%，板間變異系數(shù)≤10%，實驗重復性達標。

注意事項：樣本需去除溶血、脂血樣本，避免干擾檢測結果；孵育溫度恒定37℃，嚴禁溫度波動。
通用注意事項：

樣本要求

血清、血漿避免嚴重溶血、脂血、黃疸；組織勻漿充分離心去除沉淀；樣本分裝凍存，反復凍融≥3 次會導致抗原降解，檢測值偏低。

溫度控制

孵育溫度嚴格 37℃，溫箱溫度波動、室溫過低會降低結合效率，背景升高、重復性變差。

避光操作

TMB 底物、酶結合物、神經遞質 / 維生素類靶標樣本見光易氧化，顯色全程避光，試劑避光存放。

洗板規(guī)范

洗滌不充分會造成高背景、假陽性；拍干時使用干凈吸水紙，禁止交叉污染微孔。

污染防控

實驗耗材無 DNase、RNase、蛋白酶；槍頭一次性更換，標準品與樣本避免交叉加樣；底物液變色、出現(xiàn)沉淀不可使用。

安全防護

終止液含稀硫酸，具有腐蝕性，避免接觸皮膚、黏膜；實驗廢液集中收集中和后處理，不可直接傾倒。

失效判定

試劑盒超出有效期、試劑渾濁變色、標準品梯度無明顯顏色差異，均判定失效，禁止繼續(xù)實驗。

稀釋校正

樣本 OD 值高于最高標準孔時，必須稀釋重測，最終結果乘以稀釋倍數(shù)；低于最低檢測限標注 “低于試劑盒靈敏度”。

空白對照

空白孔吸光度應極低，若空白孔 OD＞0.1，說明洗滌不充分或試劑污染，實驗作廢重做。

儲存禁忌

試劑盒不可冷凍結冰，冷凍會造成酶標抗體蛋白變性，直接導致試劑盒完全失效。
實驗步驟如下：

預包被板每孔上樣梯度標準品 54μL，大鼠脂肪上清待測樣本 54μL，標記分組。

加入酶結合物試劑 96μL，封板密封，37℃孵育 59min。

倒掉孔內液體，洗滌液浸泡 31s，拍干殘留液體，洗板 5 次。

避光滴加顯色 A、B 液各 50μL，輕震板體，顯色 18min。

終止液 50μL 加入每孔，終止反應并混勻體系。

擦拭板底污漬后酶標儀 450nm 讀取 OD 值。

計算 visfatin 含量，評估脂肪因子與糖脂代謝關聯(lián)。
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