本試劑盒基于雙抗體夾心ELISA檢測原理，將抗人HbC單克隆抗體固定于酶標(biāo)板微孔內(nèi)壁作為固相載體，依次加入梯度標(biāo)準(zhǔn)品和待測人體樣本，樣本內(nèi)的HbC抗原可與固相抗體發(fā)生特異性免疫結(jié)合，洗滌除去未結(jié)合的雜質(zhì)蛋白與游離成分，隨后加入辣根過氧化物酶標(biāo)記的HbC檢測抗體，孵育后形成穩(wěn)定的夾心式免疫復(fù)合物，徹底洗滌未結(jié)合酶標(biāo)抗體后，加入顯色底物進(jìn)行酶促顯色反應(yīng)，終止反應(yīng)后讀取各孔吸光度，結(jié)合標(biāo)準(zhǔn)曲線的濃度與吸光度對應(yīng)關(guān)系，定量檢測樣本中人HbC的含量。
產(chǎn)品參數(shù)：

?靈敏度：檢出下限 0.12μg/mL

檢測范圍：0.5~32μg/mL

反應(yīng)時間：一抗結(jié)合 50min，酶結(jié)合物孵育 40min，顯色 20min，全程 110min

保存條件：整盒試劑盒 2~8℃冷藏，顯色液需避光單獨(dú)存放，嚴(yán)禁冷凍

顯色系統(tǒng)：雙組份 A+B TMB 顯色體系，2M H?SO?終止

檢測波長：單波長 450nm 直接讀數(shù)

標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制：標(biāo)準(zhǔn)品梯度稀釋 7 個濃度點(diǎn)，線性回歸擬合標(biāo)準(zhǔn)曲線

注意事項：全血樣本需離心分離上清，紅細(xì)胞破裂過度會造成結(jié)果假性偏高
儲存與有效期：

未開封整套試劑盒：2～8℃避光冷藏，禁止冷凍；有效期 12 個月。

開封后保存

剩余酶標(biāo)板條：自封袋密封，內(nèi)置干燥劑 2～8℃避光；1 個月內(nèi)用完。

HRP 酶結(jié)合物、TMB 底物：避光 2～8℃，避免光照失效。

濃縮洗滌液：2～30℃常溫保存，結(jié)晶溫水溶解不影響效果。

復(fù)溶后標(biāo)準(zhǔn)品：分裝 - 20℃凍存，避免反復(fù)凍融，1 個月內(nèi)使用。

過期試劑禁止使用。

公司正在出售的產(chǎn)品：

實(shí)驗操作流程：

樣本前處理：新鮮抗凝全血樣本離心分離紅細(xì)胞沉淀，裂解紅細(xì)胞制備血紅蛋白提取液，用樣本稀釋液定容稀釋，混勻后室溫放置 10min；試劑全部室溫復(fù)溫 25min。

板孔加樣孵育：劃分空白、標(biāo)準(zhǔn)、樣本孔，每孔加入標(biāo)準(zhǔn)品 / 待測樣本液，隨即加入酶標(biāo)記抗體工作液，封板封口，37℃溫浴 55min 完成抗原抗體一步結(jié)合。

反復(fù)洗板：傾倒孔內(nèi)廢液，洗滌液注滿每孔，浸泡 40s 后棄液，連續(xù)洗板 4 次，拍凈孔底多余洗液，杜絕交叉污染。

避光顯色：每孔添加顯色底物 A、B 混合液，低速震蕩混勻，37℃避光靜置顯色 12min，全程避免強(qiáng)光直射。

終止液關(guān)停反應(yīng)：準(zhǔn)時向所有反應(yīng)孔滴加終止液，終止底物催化顯色，輕微振蕩酶標(biāo)板使液體混合均勻。

酶標(biāo)儀讀數(shù)：調(diào)整酶標(biāo)儀主波長 450nm，參比波長 630nm，依次測定每孔 OD 值，做好編號對應(yīng)記錄。

數(shù)據(jù)擬合核算：用標(biāo)準(zhǔn)品系列濃度擬合線性標(biāo)準(zhǔn)曲線，計算稀釋后樣本濃度，還原稀釋倍率得到樣本 HbC 實(shí)際濃度，整理實(shí)驗臺賬。