本試劑盒基于雙抗體夾心ELISA檢測原理，酶標板微孔固相包被有人游離血紅蛋白特異性單克隆抗體，加入梯度標準品及待測樣本后，樣本內的游離血紅蛋白與固相抗體發(fā)生特異性免疫結合，洗滌去除未結合組分，隨后加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的抗人游離血紅蛋白抗體，形成特異性免疫夾心復合物，經(jīng)洗滌去除多余酶標抗體后，加入TMB底物液催化顯色，顯色深淺與樣本中游離血紅蛋白含量呈正相關，終止反應后通過酶標儀檢測OD值，對照標準曲線精準定量樣本中f-Hb濃度。
產(chǎn)品參數(shù)：

?靈敏度：檢出下限 0.08μg/mL

檢測范圍：0.16μg/mL - 10μg/mL

反應時間：整體流程 105min，一抗孵育 40min，二抗孵育 30min，顯色終止 15min

保存條件：試劑盒整體 2～8℃冷藏；濃縮洗滌液室溫存放，出現(xiàn)結晶溫水溶解即可

顯色系統(tǒng)：TMB 雙液顯色體系，A 液 B 液等量混合使用

檢測波長：單波長 450nm 直接讀數(shù)

標準曲線繪制：采用線性回歸法擬合標準曲線，剔除偏離過大標準孔后計算樣本濃度

注意事項：溶血樣本會嚴重干擾本指標檢測，送檢樣本嚴禁溶血
關鍵注意事項：

本試劑盒僅科研體外檢測，嚴禁臨床診斷使用。

全程避免試劑、板條強光直射，TMB 見光易失效。

移液器吸頭一次性使用，杜絕交叉污染；所有操作無酶、無熱源。

孵育溫度嚴格控制 37℃，溫度偏低會降低 OD 值、靈敏度下降。

洗板必須充分，殘液會造成非特異性結合，背景偏高。

終止后需快速讀數(shù)，放置過久吸光度會漂移，結果失真。

終止液含稀硫酸，避免接觸皮膚、眼睛，若不慎接觸大量清水沖洗。

實驗廢棄物按生物安全廢棄物規(guī)范處理。

不同批次試劑盒組分不可混用。

試劑盒運輸全程 2～8℃冷鏈，嚴禁高溫暴曬。

公司正在出售的產(chǎn)品：

實驗操作流程：

取出試劑盒所有組分室溫放置 25min，按說明書倍比稀釋 f-Hb 標準品系列濃度，待測樣本用配套稀釋液適度稀釋，標記酶標板各孔組別。

空白孔加稀釋緩沖液，標準品孔加不同濃度 f-Hb 標準品，樣本孔加入預處理后的待測體液樣本，加樣槍垂直加樣防止交叉污染。

一步法體系直接向全部孔中添加酶標記一抗工作液，微量震蕩儀低速震蕩 30s 使孔內液體充分混勻。

封板封口后置于 37℃濕盒避光孵育 55min，禁止中途掀開封板膜，防止揮發(fā)與外源污染。

手動洗板操作：每孔加滿洗滌液，靜置 25s 后倒扣拍凈，重復洗板 4 次，最后一次充分拍干孔內殘余洗液。

避光條件下每孔加入 TMB 單組份顯色液，37℃避光顯色 12min，對照標準品孔顏色深淺把控顯色時長。

加入 2M 硫酸終止液終止反應，酶標儀 450nm 波長測定吸光度，擬合標準曲線換算樣本游離血紅蛋白含量并記錄數(shù)據(jù)。