本試劑盒基于雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附技術原理，微孔板預先包被人Hb-AGE特異性捕獲抗體，加入待測樣本與標準品后，體系中的Hb-AGE抗原與固相抗體特異性結合，洗滌清除未結合雜質，再加入辣根過氧化物酶標記的Hb-AGE檢測抗體，孵育形成特異性免疫復合物，經洗滌純化后加入顯色底物發(fā)生酶促顯色反應，終止反應后測定吸光度，依據(jù)標準曲線的線性關系，定量檢測人體樣本中Hb-AGE的含量。
產品參數(shù)：

?靈敏度：檢出限 0.15U/mL

檢測范圍：0.625~40U/mL

反應時間：封閉后樣本孵育 80min，二抗 60min，顯色 22min，總 162min

保存條件：全套試劑 2~8℃避光，濃縮洗滌液低溫會析出結晶，溫水溶解后使用

顯色系統(tǒng)：OPD 顯色系統(tǒng)，硫酸終止

檢測波長：492nm 檢測，650nm 參比

標準曲線繪制：倍比稀釋標準品，直線擬合建立標準曲線

注意事項：糖化樣本避免高溫處理，會破壞 AGE 抗原結構導致檢測失真
通用注意事項：

樣本要求

血清、血漿避免嚴重溶血、脂血、黃疸；組織勻漿充分離心去除沉淀；樣本分裝凍存，反復凍融≥3 次會導致抗原降解，檢測值偏低。

溫度控制

孵育溫度嚴格 37℃，溫箱溫度波動、室溫過低會降低結合效率，背景升高、重復性變差。

避光操作

TMB 底物、酶結合物、神經遞質 / 維生素類靶標樣本見光易氧化，顯色全程避光，試劑避光存放。

洗板規(guī)范

洗滌不充分會造成高背景、假陽性；拍干時使用干凈吸水紙，禁止交叉污染微孔。

污染防控

實驗耗材無 DNase、RNase、蛋白酶；槍頭一次性更換，標準品與樣本避免交叉加樣；底物液變色、出現(xiàn)沉淀不可使用。

安全防護

終止液含稀硫酸，具有腐蝕性，避免接觸皮膚、黏膜；實驗廢液集中收集中和后處理，不可直接傾倒。

失效判定

試劑盒超出有效期、試劑渾濁變色、標準品梯度無明顯顏色差異，均判定失效，禁止繼續(xù)實驗。

稀釋校正

樣本 OD 值高于最高標準孔時，必須稀釋重測，最終結果乘以稀釋倍數(shù)；低于最低檢測限標注 “低于試劑盒靈敏度”。

空白對照

空白孔吸光度應極低，若空白孔 OD＞0.1，說明洗滌不充分或試劑污染，實驗作廢重做。

儲存禁忌

試劑盒不可冷凍結冰，冷凍會造成酶標抗體蛋白變性，直接導致試劑盒完全失效。

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實驗操作流程：

樣本稀釋制備：血紅蛋白提取液使用樣本稀釋液按說明書比例稀釋，充分渦旋混勻，室溫靜置 12min；試劑盒整套組分室溫平衡 35min。

一步法共加樣孵育：各微孔加入標準品溶液、待測樣本液及酶標記工作液，封板密封，37℃孵育 60min 進行免疫結合反應。

多次洗板去除未結合物：棄液后加滿洗滌液，浸泡 45s 棄去，重復洗板 4 次，徹底拍干微孔內多余液體。

避光底物顯色：每孔加入顯色底物混合液，水平搖勻，37℃避光顯色 16min。

終止反應體系：滴加終止液終止顯色，緩慢晃動酶標板使每孔液體混勻。

吸光度檢測：酶標儀 450nm 單波長檢測每孔 OD 值，逐條記錄原始檢測數(shù)據(jù)。

標準曲線定量：依托標準品數(shù)據(jù)繪制標準曲線，計算樣本稀釋后濃度，還原稀釋倍數(shù)得到 Hb-AGE 最終含量，留存檢測記錄。