本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA檢測(cè)原理，酶標(biāo)板微孔預(yù)先包被人PFKP特異性捕獲抗體，加入梯度標(biāo)準(zhǔn)品和待測(cè)樣本后，樣本中的PFKP抗原與固相抗體特異性結(jié)合，洗滌清除非特異性結(jié)合物質(zhì)，加入酶標(biāo)記PFKP檢測(cè)抗體構(gòu)建夾心免疫復(fù)合物，二次洗滌后加入顯色底物顯色，終止反應(yīng)后檢測(cè)吸光度，結(jié)合標(biāo)準(zhǔn)曲線精準(zhǔn)定量樣本中PFKP的濃度。
產(chǎn)品參數(shù)：

?靈敏度：檢出限 0.05U/L

檢測(cè)范圍：0.156~10U/L

反應(yīng)時(shí)間：樣本溫育 65min，酶結(jié)合物 50min，避光顯色 14min，總 129min

保存條件：2~8℃儲(chǔ)存，濃縮試劑嚴(yán)禁結(jié)冰凍裂瓶體

顯色系統(tǒng)：避光 TMB 顯色體系

檢測(cè)波長(zhǎng)：450nm 讀取 OD

標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制：六點(diǎn)位標(biāo)準(zhǔn)品，直線回歸計(jì)算校準(zhǔn)公式

注意事項(xiàng)：酶蛋白對(duì)溫度敏感，樣本離體后盡快低溫處理
通用注意事項(xiàng)：

樣本要求

血清、血漿避免嚴(yán)重溶血、脂血、黃疸；組織勻漿充分離心去除沉淀；樣本分裝凍存，反復(fù)凍融≥3 次會(huì)導(dǎo)致抗原降解，檢測(cè)值偏低。

溫度控制

孵育溫度嚴(yán)格 37℃，溫箱溫度波動(dòng)、室溫過(guò)低會(huì)降低結(jié)合效率，背景升高、重復(fù)性變差。

避光操作

TMB 底物、酶結(jié)合物、神經(jīng)遞質(zhì) / 維生素類(lèi)靶標(biāo)樣本見(jiàn)光易氧化，顯色全程避光，試劑避光存放。

洗板規(guī)范

洗滌不充分會(huì)造成高背景、假陽(yáng)性；拍干時(shí)使用干凈吸水紙，禁止交叉污染微孔。

污染防控

實(shí)驗(yàn)耗材無(wú) DNase、RNase、蛋白酶；槍頭一次性更換，標(biāo)準(zhǔn)品與樣本避免交叉加樣；底物液變色、出現(xiàn)沉淀不可使用。

安全防護(hù)

終止液含稀硫酸，具有腐蝕性，避免接觸皮膚、黏膜；實(shí)驗(yàn)廢液集中收集中和后處理，不可直接傾倒。

失效判定

試劑盒超出有效期、試劑渾濁變色、標(biāo)準(zhǔn)品梯度無(wú)明顯顏色差異，均判定失效，禁止繼續(xù)實(shí)驗(yàn)。

稀釋校正

樣本 OD 值高于最高標(biāo)準(zhǔn)孔時(shí)，必須稀釋重測(cè)，最終結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)；低于最低檢測(cè)限標(biāo)注 “低于試劑盒靈敏度”。

空白對(duì)照

空白孔吸光度應(yīng)極低，若空白孔 OD＞0.1，說(shuō)明洗滌不充分或試劑污染，實(shí)驗(yàn)作廢重做。

儲(chǔ)存禁忌

試劑盒不可冷凍結(jié)冰，冷凍會(huì)造成酶標(biāo)抗體蛋白變性，直接導(dǎo)致試劑盒完全失效。

公司正在出售的產(chǎn)品：

實(shí)驗(yàn)操作流程：

細(xì)胞裂解樣本稀釋?zhuān)貉“辶呀庖合♂尨郎y(cè)樣品，渦旋混勻 15s，室溫靜置 9min；試劑盒室溫復(fù)溫 30min。

一步加樣免疫結(jié)合：微孔加入標(biāo)準(zhǔn)品、樣本及酶標(biāo)記試劑，封板 37℃孵育 69min。

多次洗板除雜：洗滌液浸泡 45s，洗板 5 次，徹底拍干微孔殘留洗滌液。

避光顯色：添加顯色液混勻，37℃避光顯色 18min。

終止液終止：滴加終止液終止顯色反應(yīng)。

吸光度讀取：450nm 檢測(cè)各孔 OD 值記錄原始數(shù)據(jù)。

定量核算：標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣本 PFKP 最終濃度。