本試劑盒運用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附檢測原理，微孔板預(yù)先包被抗人EloA特異性抗體，作為固相捕獲位點，加入標(biāo)準(zhǔn)品與待測樣本后，樣本中的EloA抗原特異性結(jié)合至固相抗體，洗滌去除未結(jié)合雜蛋白，加入酶標(biāo)記EloA檢測抗體形成穩(wěn)定的免疫夾心復(fù)合物，洗滌游離酶標(biāo)抗體后進(jìn)行底物顯色，終止反應(yīng)后檢測吸光度，依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線定量測定樣本中EloA的含量。
產(chǎn)品參數(shù)：

?靈敏度：檢出下限 0.07ng/mL

檢測范圍：0.25~16ng/mL

反應(yīng)時間：37℃結(jié)合 55min，酶標(biāo)二抗 60min，顯色 19min，總 134min

保存條件：未拆封 2~8℃，標(biāo)準(zhǔn)品干粉 - 20℃長期保存

顯色系統(tǒng)：單組份穩(wěn)定 TMB 底物

檢測波長：450nm 單一波長讀數(shù)

標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制：八點倍比稀釋，四參數(shù) Logistic 繪制曲線

注意事項：操作過程避免手觸碰微孔板底部，影響酶標(biāo)儀讀數(shù)
通用注意事項：

樣本要求

血清、血漿避免嚴(yán)重溶血、脂血、黃疸；組織勻漿充分離心去除沉淀；樣本分裝凍存，反復(fù)凍融≥3 次會導(dǎo)致抗原降解，檢測值偏低。

溫度控制

孵育溫度嚴(yán)格 37℃，溫箱溫度波動、室溫過低會降低結(jié)合效率，背景升高、重復(fù)性變差。

避光操作

TMB 底物、酶結(jié)合物、神經(jīng)遞質(zhì) / 維生素類靶標(biāo)樣本見光易氧化，顯色全程避光，試劑避光存放。

洗板規(guī)范

洗滌不充分會造成高背景、假陽性；拍干時使用干凈吸水紙，禁止交叉污染微孔。

污染防控

實驗耗材無 DNase、RNase、蛋白酶；槍頭一次性更換，標(biāo)準(zhǔn)品與樣本避免交叉加樣；底物液變色、出現(xiàn)沉淀不可使用。

安全防護(hù)

終止液含稀硫酸，具有腐蝕性，避免接觸皮膚、黏膜；實驗廢液集中收集中和后處理，不可直接傾倒。

失效判定

試劑盒超出有效期、試劑渾濁變色、標(biāo)準(zhǔn)品梯度無明顯顏色差異，均判定失效，禁止繼續(xù)實驗。

稀釋校正

樣本 OD 值高于最高標(biāo)準(zhǔn)孔時，必須稀釋重測，最終結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)；低于最低檢測限標(biāo)注 “低于試劑盒靈敏度”。

空白對照

空白孔吸光度應(yīng)極低，若空白孔 OD＞0.1，說明洗滌不充分或試劑污染，實驗作廢重做。

儲存禁忌

試劑盒不可冷凍結(jié)冰，冷凍會造成酶標(biāo)抗體蛋白變性，直接導(dǎo)致試劑盒完全失效。

公司正在出售的產(chǎn)品：

實驗操作流程：

細(xì)胞上清 / 血清樣本稀釋：稀釋液配比稀釋樣本，顛倒混勻，室溫靜置 12min；試劑盒組分室溫平衡 35min。

共加樣封板孵育：各孔加入標(biāo)準(zhǔn)品、待測樣本與酶標(biāo)記工作液，密封酶標(biāo)板，37℃孵育 72min。

洗板操作：洗滌液浸泡微孔 40s，洗板 5 次，吸水紙倒扣拍干微孔。

避光顯色：加入顯色雙液混勻，37℃避光顯色 16min。

終止顯色：添加終止液終止酶促顯色并混勻。

酶標(biāo)儀測值：450nm 檢測每孔 OD 吸光度并記錄。

濃度換算：標(biāo)準(zhǔn)曲線帶入樣本 OD 值，折算稀釋倍數(shù)得到 EloA 濃度。