本試劑盒運(yùn)用經(jīng)典雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附檢測(cè)原理，將特異性識(shí)別人人足細(xì)胞標(biāo)記蛋白（PCX）的抗體包被于酶標(biāo)板微孔表面。檢測(cè)體系中，樣本及標(biāo)準(zhǔn)品中的PCX抗原與固相包被抗體發(fā)生特異性免疫結(jié)合，洗孔去除未結(jié)合的雜質(zhì)蛋白與體液成分后，加入HRP標(biāo)記的PCX檢測(cè)抗體，形成穩(wěn)定的免疫夾心復(fù)合物。后續(xù)加入TMB底物進(jìn)行酶促顯色反應(yīng)，顯色深淺與樣本中PCX含量成正比，經(jīng)終止液終止反應(yīng)后，利用酶標(biāo)儀檢測(cè)對(duì)應(yīng)波長(zhǎng)吸光度，對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)曲線即可精準(zhǔn)定量樣本中足細(xì)胞標(biāo)記蛋白的濃度。
基本參數(shù)?：
產(chǎn)品名稱(chēng)：人足細(xì)胞標(biāo)記蛋白/足盂蛋白(PCX)ELISA試劑盒
英文名稱(chēng)：PCX Elisa Kit
貨號(hào)：Y-E238
規(guī)格：48T/96T
靈敏度：最小檢出值 0.08ng/mL
檢測(cè)范圍：0.2ng/mL～25ng/mL
反應(yīng)時(shí)間：樣本室溫孵育 75min，酶標(biāo)二抗 50min，底物避光顯色 12min，終止讀數(shù)，合計(jì) 137min
保存條件：試劑盒全程 2～8℃避光；剩余微孔板條放入自封袋加干燥劑密封冷藏，有效期內(nèi)用完，不可室溫久置
顯色系統(tǒng)：可溶性 TMB 顯色底物，酸性終止液終止顯色
檢測(cè)波長(zhǎng)：450nm 為主，620nm 作為校正波長(zhǎng)
標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制：8 個(gè)梯度標(biāo)準(zhǔn)品濃度，使用 Origin 軟件四參數(shù)擬合曲線，剔除異常孔數(shù)值后擬合
注意事項(xiàng)：尿液樣本需過(guò)濾去除細(xì)胞雜質(zhì)；所有耗材無(wú)蛋白污染，防止本底 OD 值升高；終止液具有腐蝕性，避免皮膚直接接觸。
通用注意事項(xiàng)：
樣本要求
血清、血漿避免嚴(yán)重溶血、脂血、黃疸；組織勻漿充分離心去除沉淀；樣本分裝凍存，反復(fù)凍融≥3 次會(huì)導(dǎo)致抗原降解，檢測(cè)值偏低。
溫度控制
孵育溫度嚴(yán)格 37℃，溫箱溫度波動(dòng)、室溫過(guò)低會(huì)降低結(jié)合效率，背景升高、重復(fù)性變差。
避光操作
TMB 底物、酶結(jié)合物、神經(jīng)遞質(zhì) / 維生素類(lèi)靶標(biāo)樣本見(jiàn)光易氧化，顯色全程避光，試劑避光存放。
洗板規(guī)范
洗滌不充分會(huì)造成高背景、假陽(yáng)性；拍干時(shí)使用干凈吸水紙，禁止交叉污染微孔。
污染防控
實(shí)驗(yàn)耗材無(wú) DNase、RNase、蛋白酶；槍頭一次性更換，標(biāo)準(zhǔn)品與樣本避免交叉加樣；底物液變色、出現(xiàn)沉淀不可使用。
安全防護(hù)
終止液含稀硫酸，具有腐蝕性，避免接觸皮膚、黏膜；實(shí)驗(yàn)廢液集中收集中和后處理，不可直接傾倒。
失效判定
試劑盒超出有效期、試劑渾濁變色、標(biāo)準(zhǔn)品梯度無(wú)明顯顏色差異，均判定失效，禁止繼續(xù)實(shí)驗(yàn)。
稀釋校正
樣本 OD 值高于最高標(biāo)準(zhǔn)孔時(shí)，必須稀釋重測(cè)，最終結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)；低于最低檢測(cè)限標(biāo)注 “低于試劑盒靈敏度”。
空白對(duì)照
空白孔吸光度應(yīng)極低，若空白孔 OD＞0.1，說(shuō)明洗滌不充分或試劑污染，實(shí)驗(yàn)作廢重做。
儲(chǔ)存禁忌
試劑盒不可冷凍結(jié)冰，冷凍會(huì)造成酶標(biāo)抗體蛋白變性，直接導(dǎo)致試劑盒完全失效。
實(shí)驗(yàn)步驟如下：
提前 28min 取出試劑盒解凍回溫，稀釋濃縮洗液，梯度稀釋 PCX 標(biāo)準(zhǔn)品并做好標(biāo)記。
酶標(biāo)板分區(qū)加樣：標(biāo)準(zhǔn)品梯度孔、待測(cè)血清 / 組織上清樣本孔、空白孔，垂直加樣防止孔壁掛液。
一步添加酶標(biāo)記一抗工作液，覆膜封口，置于 37℃恒溫孵育箱避光反應(yīng) 55min。
去封膜，甩干孔內(nèi)液體，洗板 6 輪，每次注滿洗滌液靜置 30s，徹底拍干微孔。
加入 TMB 顯色液，室溫避光靜置顯色 18min，觀察標(biāo)準(zhǔn)孔梯度藍(lán)色區(qū)分度。
每孔滴加終止液終止催化反應(yīng)，震蕩酶標(biāo)板 5~10 秒混勻體系。
450nm 波長(zhǎng)測(cè)定吸光度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算樣本中 PCX 蛋白濃度。
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關(guān)鍵字： 人足細(xì)胞標(biāo)記蛋白/足盂蛋白;PCX;ELISA試劑盒;
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