本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)原理，預(yù)先將純化的人CVL特異性抗體包被于96孔微孔板中，形成固相抗體，向微孔中依次加入標(biāo)準(zhǔn)品、待測樣本，樣本中的CVL抗原會與固相抗體特異性結(jié)合，充分洗滌去除未結(jié)合的雜質(zhì)后，加入辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的二抗，形成固相抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，再次洗滌洗去游離酶標(biāo)抗體，加入底物顯色液進(jìn)行顯色反應(yīng)，在酸性終止液終止反應(yīng)后，通過酶標(biāo)儀測定各孔吸光度（OD值），OD值與樣本中人CVL含量呈正相關(guān)，結(jié)合標(biāo)準(zhǔn)曲線即可計(jì)算出樣本中CVL的濃度。
基本參數(shù)?：
產(chǎn)品名稱：人細(xì)胞絨毛蛋白/埃茲蛋白(CVL)ELISA試劑盒
英文名稱：CVL ELISA Kit
貨號：Y-E2980
規(guī)格：48T/96T
靈敏度：最低可檢測量 0.15ng/mL
檢測范圍：0.312-20ng/mL
反應(yīng)時間：樣本孵育 90min，洗滌后二抗孵育 60min，顯色避光 15min，終止后立即讀數(shù)
保存條件：未開封試劑盒 2-8℃避光保存；開封后板條密封 2-8℃，顯色液 A/B 避光單獨(dú)冷藏，有效期 6 個月
顯色系統(tǒng)：TMB 雙組分顯色液，HRP 酶促底物顯色
檢測波長：主波長 450nm，參比波長 630nm
標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制：以標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)，對應(yīng) OD 值為縱坐標(biāo)，采用四參數(shù) Logistic 擬合生成標(biāo)準(zhǔn)曲線，代入樣本 OD 值換算濃度
注意事項(xiàng)：CVL 易吸附于塑料管壁，樣本稀釋全程使用低吸附離心管；顯色步驟嚴(yán)格避光，超時顯色會造成結(jié)果偏高
關(guān)鍵注意事項(xiàng)：
本試劑盒僅科研體外檢測，嚴(yán)禁臨床診斷使用。
全程避免試劑、板條強(qiáng)光直射，TMB 見光易失效。
移液器吸頭一次性使用，杜絕交叉污染；所有操作無酶、無熱源。
孵育溫度嚴(yán)格控制 37℃，溫度偏低會降低 OD 值、靈敏度下降。
洗板必須充分，殘液會造成非特異性結(jié)合，背景偏高。
終止后需快速讀數(shù)，放置過久吸光度會漂移，結(jié)果失真。
終止液含稀硫酸，避免接觸皮膚、眼睛，若不慎接觸大量清水沖洗。
實(shí)驗(yàn)廢棄物按生物安全廢棄物規(guī)范處理。
不同批次試劑盒組分不可混用。
試劑盒運(yùn)輸全程 2～8℃冷鏈，嚴(yán)禁高溫暴曬。
實(shí)驗(yàn)步驟如下：
取出試劑盒室溫平衡 30min，設(shè)置空白孔、標(biāo)準(zhǔn)品孔、待測樣品孔，每孔預(yù)先加入一步法酶結(jié)合工作液 50μL。
標(biāo)準(zhǔn)品孔依次加入梯度稀釋 CVL 標(biāo)準(zhǔn)品 50μL，樣品孔加入稀釋后待測樣本 50μL，空白孔僅加等量稀釋液，封板膜封板。
37℃恒溫孵育 60min，棄去孔內(nèi)全部液體，洗板機(jī)洗板 5 次，每次浸泡 30s，拍干孔內(nèi)殘留液體。
每孔加入顯色底物 A 液 50μL、顯色底物 B 液 50μL，輕柔震蕩混勻。
避光 37℃顯色 15min，肉眼可見標(biāo)準(zhǔn)品孔出現(xiàn)明顯藍(lán)色梯度即可終止反應(yīng)。
每孔快速加入終止液 50μL，孔內(nèi)液體由藍(lán)轉(zhuǎn)為黃色，終止顯色。
酶標(biāo)儀 450nm 波長測定各孔 OD 值，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品曲線計(jì)算樣本 CVL 濃度。
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關(guān)鍵字： 人細(xì)胞絨毛蛋白/埃茲蛋白;CVL;ELISA試劑盒;
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