本試劑盒采用經(jīng)典雙抗體夾心ELISA原理，將高特異性人魚精蛋白1抗體固定于酶標(biāo)板微孔表面作為固相載體，加入標(biāo)準(zhǔn)品與待測樣本后，樣本中的PRM1抗原與固相抗體特異性結(jié)合，孵育平衡后洗板去除未結(jié)合物質(zhì)，加入酶標(biāo)記PRM1檢測抗體，形成固相抗體- PRM1抗原-酶標(biāo)抗體三元復(fù)合物，經(jīng)底物顯色、終止反應(yīng)后，酶標(biāo)儀讀取各孔OD值，顯色強度與樣本中PRM1濃度成正比，依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線即可準(zhǔn)確計算樣本中目標(biāo)蛋白的含量。
產(chǎn)品參數(shù)：

?靈敏度：最低檢出值 0.09ng/L

檢測范圍：0.18ng/L - 12ng/L

反應(yīng)時間：固相包被結(jié)合 35min，酶標(biāo)二抗孵育 35min，顯色反應(yīng) 10min

保存條件：全套試劑 2～8℃保存，終止液常溫密封可存放 6 個月

顯色系統(tǒng)：改良型 TMB 穩(wěn)定顯色液，無需現(xiàn)配

檢測波長：450nm，建議 570nm 作為校正波長

標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制：梯度標(biāo)準(zhǔn)品做復(fù)孔檢測，取均值后擬合非線性標(biāo)準(zhǔn)曲線

注意事項：精液樣本需充分液化后離心取上清檢測，雜質(zhì)易造成孔底沉淀
通用注意事項：

樣本要求

血清、血漿避免嚴(yán)重溶血、脂血、黃疸；組織勻漿充分離心去除沉淀；樣本分裝凍存，反復(fù)凍融≥3 次會導(dǎo)致抗原降解，檢測值偏低。

溫度控制

孵育溫度嚴(yán)格 37℃，溫箱溫度波動、室溫過低會降低結(jié)合效率，背景升高、重復(fù)性變差。

避光操作

TMB 底物、酶結(jié)合物、神經(jīng)遞質(zhì) / 維生素類靶標(biāo)樣本見光易氧化，顯色全程避光，試劑避光存放。

洗板規(guī)范

洗滌不充分會造成高背景、假陽性；拍干時使用干凈吸水紙，禁止交叉污染微孔。

污染防控

實驗耗材無 DNase、RNase、蛋白酶；槍頭一次性更換，標(biāo)準(zhǔn)品與樣本避免交叉加樣；底物液變色、出現(xiàn)沉淀不可使用。

安全防護(hù)

終止液含稀硫酸，具有腐蝕性，避免接觸皮膚、黏膜；實驗廢液集中收集中和后處理，不可直接傾倒。

失效判定

試劑盒超出有效期、試劑渾濁變色、標(biāo)準(zhǔn)品梯度無明顯顏色差異，均判定失效，禁止繼續(xù)實驗。

稀釋校正

樣本 OD 值高于最高標(biāo)準(zhǔn)孔時，必須稀釋重測，最終結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)；低于最低檢測限標(biāo)注 “低于試劑盒靈敏度”。

空白對照

空白孔吸光度應(yīng)極低，若空白孔 OD＞0.1，說明洗滌不充分或試劑污染，實驗作廢重做。

儲存禁忌

試劑盒不可冷凍結(jié)冰，冷凍會造成酶標(biāo)抗體蛋白變性，直接導(dǎo)致試劑盒完全失效。

公司正在出售的產(chǎn)品：

實驗操作流程：

試劑室溫平衡 30min，梯度稀釋 PRM1 標(biāo)準(zhǔn)品，精液上清待測樣本用試劑盒稀釋液稀釋，標(biāo)注酶標(biāo)板標(biāo)準(zhǔn)、樣本、空白孔。

按既定加樣體積分別向?qū)?yīng)孔添加標(biāo)準(zhǔn)品、待測樣本、空白稀釋液，加樣避免觸碰酶標(biāo)板孔壁包被層。

一步法直接添加酶標(biāo)記 PRM1 二抗工作液至全部微孔，水平搖晃酶標(biāo)板 15s 混勻體系。

密封封板，37℃濕盒孵育 60min，全程避光放置，防止酶標(biāo)抗體失活。

棄掉孔內(nèi)液體，洗板液洗板 5 次，每次浸泡 30s，倒扣在吸水紙上徹底拍干殘留洗液。

避光加入顯色底物 AB 液混合液，37℃避光顯色 14min，觀察梯度顯色區(qū)分度。

加入終止液終止反應(yīng)，450nm 波長讀取 OD 值，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計算樣本 PRM1 蛋白表達(dá)含量。