本試劑盒基于雙抗體夾心免疫酶標技術原理，酶標板微孔包被純化的人原鈣黏素1特異性捕獲抗體，加入待測樣本和梯度標準品后，樣本中的PCDH1抗原與固相捕獲抗體特異性結(jié)合，孵育結(jié)束后洗滌除去未結(jié)合雜質(zhì)，加入HRP標記的PCDH1檢測抗體，形成穩(wěn)定的免疫夾心復合物，后續(xù)通過底物催化顯色、終止反應，利用酶標儀檢測吸光度，結(jié)合標準曲線線性關系，定量檢測樣本中人原鈣黏素1的表達含量。
產(chǎn)品參數(shù)：

?靈敏度：檢測限 0.27pg/mL

檢測范圍：0.54pg/mL - 35pg/mL

反應時間：第一步孵育 50min，第二步酶孵育 40min，顯色 15min

保存條件：試劑盒 2-8℃，不可凍存；濃縮標本稀釋液室溫保存

顯色系統(tǒng)：HRP 催化 TMB 顯色，硫酸溶液終止

檢測波長：450nm 參比 620nm

標準曲線繪制：以標準品稀釋梯度對應 OD 值，Origin 軟件四參數(shù)擬合曲線

注意事項：細胞上清樣本需去除細胞碎片，離心后再上機檢測
實驗前準備工作：

1. 試劑平衡與稀釋

試劑盒所有組分（酶標板、標準品、酶結(jié)合物、底物、洗滌濃縮液、樣本稀釋液、終止液）從 2~8℃取出，室溫（20~25℃）放置平衡 30min，嚴禁直接低溫操作。

濃縮洗滌液配制：按標簽標注比例用去離子純水稀釋（常見 20× 濃縮液：1 份濃縮液 + 19 份純水），混勻備用，現(xiàn)配現(xiàn)用。

標準品復溶 / 梯度稀釋：

凍干標準品加入配套標準品稀釋液充分溶解，室溫靜置 10min，輕柔吹打混勻；

按說明書梯度倍比稀釋出 5~7 個濃度梯度標準品，單獨標記，剩余原液分裝 - 20℃避光保存，避免反復凍融。

待測樣本預處理：血清 / 血漿、組織勻漿、細胞上清用樣本稀釋液適當稀釋，渾濁樣本 12000r/min 離心 10min 取上清；溶血、脂血嚴重樣本棄用。

2. 耗材與設備準備

設備：恒溫 37℃孵育箱、酶標儀（450nm 主波長，630nm 參比）、多通道移液槍、吸水濾紙、洗板機（或手動洗板槽）、封板膜、離心管。

耗材無核酸酶、無熱源、無蛋白污染，移液槍提前校準。

取出本次實驗所需酶標板條，剩余未使用板條裝入鋁箔密封袋，加干燥劑 2~8℃避光保存。

3. 孔位規(guī)劃標記

酶標板做好分區(qū)標記：空白孔、零標準孔、梯度標準品孔、待測樣本孔、復孔（所有樣本、標準品建議設置雙復孔降低誤差）。

公司正在出售的產(chǎn)品：

實驗操作流程：

試劑盒室溫靜置 25min，配置 PCDH1 標準品系列濃度梯度，細胞上清樣本稀釋預處理，標記酶標板所有微孔用途。

空白孔加緩沖稀釋液，標準品孔依次加不同濃度標準品，樣本孔加入待測上清樣本，精準控制每孔加樣體積一致。

直接向全部微孔加入酶標記抗體工作液，無需預孵育洗板，手動輕晃酶標板混勻反應體系。

封板密封后 37℃避光孵育 70min，不可疊加放置酶標板影響受熱均勻度。

廢液倒出，洗板液每孔加滿浸泡 28s，連續(xù)洗板 4 次，充分拍干微孔內(nèi)液體。

避光添加 TMB 顯色液，室溫顯色 16min，依據(jù)標準品顏色梯度確定終止時機。

終止液滴加終止顯色，酶標儀 450nm 檢測吸光值，通過標準曲線計算樣本 PCDH1 濃度。