本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)原理，微孔板固相包被有小鼠胚胎干細(xì)胞系MESPU30（M30）特異性識(shí)別抗體。檢測(cè)時(shí)，樣本與標(biāo)準(zhǔn)品中的M30抗原與固相抗體特異性結(jié)合，洗滌去除游離雜質(zhì)成分后，加入辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的檢測(cè)抗體，形成穩(wěn)定的免疫夾心結(jié)構(gòu)。充分洗滌后加入TMB底物顯色，酶促反應(yīng)產(chǎn)生的顯色產(chǎn)物濃度與樣本中M30含量成正比，終止反應(yīng)后測(cè)定吸光度值，依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線可精準(zhǔn)定量樣本中目標(biāo)蛋白濃度。
基本參數(shù)?：

產(chǎn)品名稱：小鼠胚胎干細(xì)胞系MESPU30(M30)ELISA試劑盒

英文名稱：M30 ELISA Kit
貨號(hào)：Y-E2224

規(guī)格：48T/96T

靈敏度：最低檢出 0.12ng/mL

檢測(cè)范圍：0.26ng/mL～24ng/mL

反應(yīng)時(shí)間：樣本孵育 115min，酶標(biāo)記物 64min，避光顯色 27min，終止 5min 內(nèi)檢測(cè)，總時(shí)長(zhǎng) 206min

保存條件：試劑盒 2～8℃；標(biāo)準(zhǔn)品分裝 - 20℃凍存，其余組分 2～8℃常規(guī)存放

顯色系統(tǒng)：高靈敏度 TMB 顯色體系

檢測(cè)波長(zhǎng)：450nm+630nm 雙波長(zhǎng)校正

標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制：八點(diǎn)倍比稀釋標(biāo)準(zhǔn)品，四參數(shù) Logistic 擬合標(biāo)準(zhǔn)曲線

注意事項(xiàng)：干細(xì)胞裂解樣本去除細(xì)胞團(tuán)塊；全程無(wú)菌操作防止微生物干擾顯色。
通用注意事項(xiàng)：

樣本要求

血清、血漿避免嚴(yán)重溶血、脂血、黃疸；組織勻漿充分離心去除沉淀；樣本分裝凍存，反復(fù)凍融≥3 次會(huì)導(dǎo)致抗原降解，檢測(cè)值偏低。

溫度控制

孵育溫度嚴(yán)格 37℃，溫箱溫度波動(dòng)、室溫過(guò)低會(huì)降低結(jié)合效率，背景升高、重復(fù)性變差。

避光操作

TMB 底物、酶結(jié)合物、神經(jīng)遞質(zhì) / 維生素類靶標(biāo)樣本見(jiàn)光易氧化，顯色全程避光，試劑避光存放。

洗板規(guī)范

洗滌不充分會(huì)造成高背景、假陽(yáng)性；拍干時(shí)使用干凈吸水紙，禁止交叉污染微孔。

污染防控

實(shí)驗(yàn)耗材無(wú) DNase、RNase、蛋白酶；槍頭一次性更換，標(biāo)準(zhǔn)品與樣本避免交叉加樣；底物液變色、出現(xiàn)沉淀不可使用。

安全防護(hù)

終止液含稀硫酸，具有腐蝕性，避免接觸皮膚、黏膜；實(shí)驗(yàn)廢液集中收集中和后處理，不可直接傾倒。

失效判定

試劑盒超出有效期、試劑渾濁變色、標(biāo)準(zhǔn)品梯度無(wú)明顯顏色差異，均判定失效，禁止繼續(xù)實(shí)驗(yàn)。

稀釋校正

樣本 OD 值高于最高標(biāo)準(zhǔn)孔時(shí)，必須稀釋重測(cè)，最終結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)；低于最低檢測(cè)限標(biāo)注 “低于試劑盒靈敏度”。

空白對(duì)照

空白孔吸光度應(yīng)極低，若空白孔 OD＞0.1，說(shuō)明洗滌不充分或試劑污染，實(shí)驗(yàn)作廢重做。

儲(chǔ)存禁忌

試劑盒不可冷凍結(jié)冰，冷凍會(huì)造成酶標(biāo)抗體蛋白變性，直接導(dǎo)致試劑盒完全失效。
實(shí)驗(yàn)步驟如下：

試劑盒室溫平衡 25min，稀釋濃縮洗滌液，配制 M30 抗原標(biāo)準(zhǔn)品稀釋梯度。

酶標(biāo)板加入標(biāo)準(zhǔn)品、胚胎細(xì)胞裂解樣本、空白稀釋液，標(biāo)記孔位。

直接添加酶標(biāo)記檢測(cè)抗體，封板 37℃孵育 61min。

洗板 4 次，浸泡 32s / 次，徹底拍干孔內(nèi)洗液。

避光顯色底物反應(yīng) 15min。

加入終止液終止反應(yīng)，輕振酶標(biāo)板混勻。

酶標(biāo)儀檢測(cè) OD 值，計(jì)算 M30 表達(dá)量。
公司正在出售的產(chǎn)品：