測定意義:
胰α-淀粉酶與α-葡萄糖苷酶是人體碳水化合物消化吸收通路中的核心級聯(lián)酶系,二者上下游協(xié)同,共同決定餐后血糖的生成速率與峰值水平:胰α-淀粉酶主要由胰腺分泌,作用于淀粉、糖原等多糖的內(nèi)部α-1,4糖苷鍵,將大分子多糖快速水解為麥芽寡糖、糊精等中間產(chǎn)物,是碳水化合物消化的第一步限速環(huán)節(jié);α-葡萄糖苷酶分布于小腸黏膜刷狀緣,作用于寡糖的非還原末端α-1,4糖苷鍵,將淀粉酶產(chǎn)生的寡糖進一步水解為可被腸道直接吸收的葡萄糖,是餐后葡萄糖釋放的終末關鍵酶。
雙酶同篩的核心意義:1.同時篩選針對兩種酶的抑制劑,可從碳水化合物水解的雙重節(jié)點阻斷葡萄糖生成,相比單酶抑制(如單用α-葡萄糖苷酶抑制劑),降糖幅度更大、餐后血糖波動更平緩,是研發(fā)抗糖尿病藥物、減肥功能食品、控糖膳食補充劑的核心篩選模型;2.本試劑盒采用經(jīng)典的CNPG3法(胰α-淀粉酶)與PNPG法(α-葡萄糖苷酶),方法學穩(wěn)定、重復性好、靈敏度高,可實現(xiàn)雙靶點抑制劑的同步高通量篩選,大幅提升降糖活性物質(zhì)的篩選效率,為糖代謝相關疾病的干預產(chǎn)品研發(fā)提供可靠的體外評價工具。
測定原理:
胰α-淀粉酶的測定采用底物顯色法,胰α-淀粉酶與底物2-氯-4-硝基苯基-α-D-吡喃麥芽三糖苷(CNPG3)反應即可釋放顯色產(chǎn)物CNP,該產(chǎn)物在405 nm波長下有特征吸收峰。加入待測抑制劑后,酶的活性受阻,產(chǎn)物生成速率降低。通過比較陰性對照管(無抑制)與測定管(含抑制劑)的吸光值,即可計算胰α-淀粉酶的抑制率,從而判斷樣品的抑制活性水平。
α-葡萄糖苷酶采用對硝基苯酚比色法,通過檢測α-葡萄糖苷酶作用下產(chǎn)生的有色產(chǎn)物來評估酶的活性。在堿性條件下,反應產(chǎn)物對硝基苯酚會迅速轉化為黃色的對硝基苯酚鹽。該黃色產(chǎn)物的吸光度在400 nm波長處具有特征吸收,其吸光值與體系中產(chǎn)生的對硝基苯酚量成正比。
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