該試劑盒專為犬小孢子菌核酸檢測研發(fā)，靶向該皮膚致病真菌特有基因序列構(gòu)建PCR擴(kuò)增體系，可精準(zhǔn)檢測動物毛發(fā)、皮屑、皮膚組織樣本中的犬小孢子菌。產(chǎn)品特異性強(qiáng)，不與其他皮膚真菌交叉反應(yīng)，靈敏度高，可早期檢出隱性真菌感染，適用于寵物皮膚病病原篩查、臨床真菌感染確診、養(yǎng)殖環(huán)境真菌污染檢測。
產(chǎn)品名稱 | 犬小孢子菌PCR檢測試劑盒 | 貨號 | YS-P014416 |
英文名稱 | Microsporum canis PCR | 規(guī)格 | 50T |
有效期 | 12個月 | 保存 | -20℃保存 |
基礎(chǔ)原理：
犬皮屑、毛發(fā)樣本裂解真菌細(xì)胞壁，提取真菌 DNA，靶向犬小孢子菌幾丁質(zhì)酶特異基因擴(kuò)增。
熔解曲線分析擴(kuò)增產(chǎn)物 Tm 值，區(qū)分犬小孢子菌與其他皮膚致病真菌。
陰性空白毛發(fā)對照，排除環(huán)境真菌氣溶膠污染干擾結(jié)果。
?操作步驟?：
DNA提?。颖局苽鋮^(qū)）
使用自選方法或兼容的核酸提取試劑盒純化樣本DNA，確保無抑制劑殘留。
標(biāo)準(zhǔn)曲線制備（樣本制備區(qū)）
標(biāo)記6支離心管為7至2號，每管加入45 μL DEPC-H2O（需使用帶濾芯槍頭）。
梯度稀釋陽性對照：
7號管：加入5 μL 1×10^8拷貝/μL陽性對照，震蕩混勻，得1×10^7拷貝/μL標(biāo)準(zhǔn)品；
依次稀釋至2號管，最終濃度跨5個數(shù)量級（1×10^7至1×10^3拷貝/μL）。
所有標(biāo)準(zhǔn)品置于冰上備用，避免反復(fù)凍融。
試劑配制（試劑準(zhǔn)備區(qū)）
反應(yīng)液避光解凍后渦旋混勻，短暫離心分裝至PCR管。
每反應(yīng)體系20 μL，含預(yù)混引物、熒光染料及緩沖液。
加樣（樣本處理區(qū)）
分別加入5 μL待測DNA或標(biāo)準(zhǔn)品至反應(yīng)管，陰性對照以DEPC-H2O替代。
蓋緊管蓋，避免氣泡干擾。
PCR擴(kuò)增（核酸擴(kuò)增區(qū)）
按以下程序運行定量PCR儀：
預(yù)變性：95℃ 2分鐘；
循環(huán)階段（40次）：95℃ 15秒 → 60℃ 30秒（采集熒光信號）；
熔解曲線分析（可選）。
?注意事項?：
試劑盒含生物源性質(zhì)粒模板，操作全程佩戴手套、口罩，陽性模板僅在生物安全柜開蓋；
所有一次性耗材、PCR 廢液、電泳凝膠實驗后 121℃高壓滅菌再丟棄；
試劑避免反復(fù)凍融，單次融化冰上放置不超過 2 h，使用完畢立即放回 - 20℃；
移液器吸頭一次性使用，禁止重復(fù)吸取，防止交叉污染；
試劑盒僅用于科研檢測，嚴(yán)禁人臨床體外診斷；
擴(kuò)增產(chǎn)物區(qū)產(chǎn)物不可帶回試劑、提取區(qū)，防止氣溶膠大面積污染實驗室；
若陰性對照持續(xù)出現(xiàn)雜帶，全部更換全新試劑盒，實驗室臺面、移液器紫外過夜消毒。
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關(guān)鍵字： 犬小孢子菌;PCR檢測試劑盒;
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