本試劑盒針對(duì)精氨酸支原體保守基因設(shè)計(jì)PCR擴(kuò)增引物,可精準(zhǔn)檢測(cè)畜禽、細(xì)胞培養(yǎng)樣本中的精氨酸支原體核酸。該支原體易造成細(xì)胞培養(yǎng)污染及畜禽慢性感染,試劑盒特異性強(qiáng)、檢出率高,適用于生物實(shí)驗(yàn)細(xì)胞質(zhì)檢、畜禽疫病篩查、微生物污染檢測(cè)。
產(chǎn)品名稱(chēng) | 精氨酸支原體PCR檢測(cè)試劑盒 | 貨號(hào) | YS-P014471 |
英文名稱(chēng) | Mycoplasma argininiPCR | 規(guī)格 | 50T |
有效期 | 12個(gè)月 | 保存 | -20℃保存 |
基礎(chǔ)原理:

人體呼吸道拭子提取支原體 DNA,引物靶向精氨酸支原體精氨酸酶編碼基因擴(kuò)增。
終點(diǎn)凝膠電泳觀察特異性擴(kuò)增條帶。
人管家基因內(nèi)參同步擴(kuò)增,確認(rèn)采樣有效。
?操作步驟?:

1. DNA提?。颖局苽鋮^(qū))
使用自選方法或兼容試劑盒提取樣本DNA,建議濃度≥10 ng/μL,A260/A280比值1.8-2.0。
2. 標(biāo)準(zhǔn)曲線制備(獨(dú)立操作區(qū))
標(biāo)記6管為梯度稀釋點(diǎn)(如7-2),每管加45 μL DEPC水。
取5 μL陽(yáng)性對(duì)照依次稀釋?zhuān)靹蚝笞鳛闃?biāo)準(zhǔn)品(避免污染)。
3. PCR反應(yīng)體系配制(試劑配制區(qū))
按以下比例配制(示例):
| 組分 | 體積(μL) |
| 2× Master Mix | 10 |
| 引物混合液 | 2 |
| DNA模板 | 2 |
| DEPC水 | 6 |
4. 上機(jī)檢測(cè)
程序設(shè)置:預(yù)變性95℃ 3 min;40循環(huán)(95℃ 10 s, 60℃ 30 s);熔解曲線分析。
數(shù)據(jù)分析:根據(jù)Ct值及標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣本濃度。
?注意事項(xiàng)?:

1、實(shí)驗(yàn)分區(qū)管理?
實(shí)驗(yàn)全程需嚴(yán)格劃分三個(gè)獨(dú)立區(qū)域:?試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣本處理區(qū)、PCR擴(kuò)增區(qū)?,各區(qū)實(shí)驗(yàn)服、移液器及耗材?嚴(yán)禁混用?,防止交叉污染。
?2、防止污染操作?
使用帶濾芯槍頭,每步更換槍頭;
陽(yáng)性對(duì)照操作應(yīng)在專(zhuān)用生物安全柜中進(jìn)行,避免污染其他試劑;
加樣后立即蓋緊管蓋,避免氣溶膠擴(kuò)散。
?3、試劑保存與使用?
所有試劑需?-20℃避光保存?,避免反復(fù)凍融,確保穩(wěn)定性;
使用前于冰上解凍并輕柔混勻,瞬時(shí)離心后使用。
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