本試劑盒聚焦巴氏細(xì)頸線蟲分子檢測，靶向該線蟲特有基因序列構(gòu)建PCR擴(kuò)增體系，可精準(zhǔn)區(qū)分巴氏細(xì)頸線蟲與其他細(xì)頸線蟲。產(chǎn)品特異性強(qiáng)、檢出限低，可輕度感染樣本，適用于畜禽寄生蟲精準(zhǔn)分型檢測、養(yǎng)殖疫病精細(xì)化防控、區(qū)域寄生蟲病監(jiān)測。
產(chǎn)品名稱 | 巴氏細(xì)頸線蟲PCR檢測試劑盒 | 貨號(hào) | YS-P014503 |
英文名稱 | Nematodirus battusPCR | 規(guī)格 | 50T |
有效期 | 12個(gè)月 | 保存 | -20℃保存 |
基礎(chǔ)原理：
牛羊糞便樣本裂解蟲卵提取線蟲 DNA，引物鎖定巴氏細(xì)頸線蟲 ITS 間隔區(qū)擴(kuò)增。
終點(diǎn)凝膠電泳特異性條帶判定線蟲感染陽性。
無菌糞便空白對(duì)照，排除環(huán)境線蟲核酸污染假陽性。
?操作步驟?：
1. DNA提?。颖局苽鋮^(qū)）
使用自選方法或兼容試劑盒提取樣本DNA，建議濃度≥10 ng/μL，A260/A280比值1.8-2.0。
2. 標(biāo)準(zhǔn)曲線制備（獨(dú)立操作區(qū)）
標(biāo)記6管為梯度稀釋點(diǎn)（如7-2），每管加45 μL DEPC水。
取5 μL陽性對(duì)照依次稀釋，混勻后作為標(biāo)準(zhǔn)品（避免污染）。
3. PCR反應(yīng)體系配制（試劑配制區(qū)）
按以下比例配制（示例）：
| 組分 | 體積（μL） |
| 2× Master Mix | 10 |
| 引物混合液 | 2 |
| DNA模板 | 2 |
| DEPC水 | 6 |
4. 上機(jī)檢測
程序設(shè)置：預(yù)變性95℃ 3 min；40循環(huán)（95℃ 10 s, 60℃ 30 s）；熔解曲線分析。
數(shù)據(jù)分析：根據(jù)Ct值及標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣本濃度。
?注意事項(xiàng)?：
1、實(shí)驗(yàn)分區(qū)管理?
實(shí)驗(yàn)全程需嚴(yán)格劃分三個(gè)獨(dú)立區(qū)域：?試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣本處理區(qū)、PCR擴(kuò)增區(qū)?，各區(qū)實(shí)驗(yàn)服、移液器及耗材?嚴(yán)禁混用?，防止交叉污染。
?2、防止污染操作?
使用帶濾芯槍頭，每步更換槍頭；
陽性對(duì)照操作應(yīng)在專用生物安全柜中進(jìn)行，避免污染其他試劑；
加樣后立即蓋緊管蓋，避免氣溶膠擴(kuò)散。
?3、試劑保存與使用?
所有試劑需?-20℃避光保存?，避免反復(fù)凍融，確保穩(wěn)定性；
使用前于冰上解凍并輕柔混勻，瞬時(shí)離心后使用。
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關(guān)鍵字： 巴氏細(xì)頸線蟲;PCR檢測試劑盒;
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