本試劑盒專為豬腸道杯狀病毒核酸檢測研發(fā)，依托高效PCR擴(kuò)增體系，靶向擴(kuò)增病毒特異性保守核酸片段，能夠精準(zhǔn)識(shí)別豬腸道杯狀病毒感染樣本，有效區(qū)分其他引發(fā)豬腹瀉的腸道病原。試劑盒體系經(jīng)過優(yōu)化，可耐受樣本中雜質(zhì)干擾，適配豬糞便、腸道黏膜等特殊樣本檢測，檢測結(jié)果穩(wěn)定、重復(fù)性好。主要用于豬病毒性腹瀉病因鑒別、仔豬腸道感染疫病排查、規(guī)?；i場腸道病毒凈化監(jiān)測，是生豬消化道疫病防控及相關(guān)病原科研研究的核心檢測工具。
產(chǎn)品名稱 | 豬腸道杯狀病毒PCR檢測試劑盒 | 貨號(hào) | YS-P014611 |
英文名稱 | Porcine Enteric Calicivirus（PECV）RTPCR | 規(guī)格 | 50T |
有效期 | 12個(gè)月 | 保存 | -20℃保存 |
基礎(chǔ)原理：
采用磁珠法裂解糞便等腸道樣本，釋放病毒基因組 RNA，去除樣本中食物殘?jiān)?、雜質(zhì)對后續(xù)反應(yīng)的抑制作用。
引物靶向豬腸道杯狀病毒衣殼蛋白編碼區(qū)，該區(qū)域序列高度保守，可區(qū)分其他腸道病毒同源序列。
實(shí)時(shí)監(jiān)測每輪擴(kuò)增熒光強(qiáng)度，當(dāng)熒光值超過閾值即判定陽性，同時(shí)設(shè)置內(nèi)參排除樣本核酸提取失敗問題。
?操作步驟?：
樣本制備：
使用CTAB法或商業(yè)DNA提取試劑盒從組織中提取基因組DNA。
建議DNA濃度≥20 ng/μL，A260/A280比值1.8~2.0。
反應(yīng)體系配制（20 μL體系示例）：
預(yù)混PCR Master Mix（含染料、dNTPs、Taq酶等）
特異性引物混合液
模板DNA（2~5 μL）
補(bǔ)充無核酸酶水至終體積。
PCR擴(kuò)增程序：
預(yù)變性：95℃ 5分鐘；
循環(huán)階段（40~45 cycles）：95℃ 10秒 → 60℃ 30秒（采集熒光信號(hào)）；
熔解曲線分析：60~95℃（可選，用于驗(yàn)證擴(kuò)增特異性）。
結(jié)果判讀：
陽性：Ct值≤35且熔解曲線峰單一；
陰性：Ct值≥40或無擴(kuò)增曲線；
可疑：35<Ct值<40，建議復(fù)測或結(jié)合熔解曲線分析。
?注意事項(xiàng)?：
1、實(shí)驗(yàn)分區(qū)管理?
實(shí)驗(yàn)全程需嚴(yán)格劃分三個(gè)獨(dú)立區(qū)域：?試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣本處理區(qū)、PCR擴(kuò)增區(qū)?，各區(qū)實(shí)驗(yàn)服、移液器及耗材?嚴(yán)禁混用?，防止交叉污染。
?2、防止污染操作?
使用帶濾芯槍頭，每步更換槍頭；
陽性對照操作應(yīng)在專用生物安全柜中進(jìn)行，避免污染其他試劑；
加樣后立即蓋緊管蓋，避免氣溶膠擴(kuò)散。
?3、試劑保存與使用?
所有試劑需?-20℃避光保存?，避免反復(fù)凍融，確保穩(wěn)定性；
使用前于冰上解凍并輕柔混勻，瞬時(shí)離心后使用。
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