本試劑盒專為牛腸杯狀病毒核酸檢測研發(fā)，依托特異性PCR擴(kuò)增技術(shù)，可靶向識別病毒保守基因片段，實(shí)現(xiàn)牛糞便、腸道組織、消化道分泌物樣本中病毒的定性檢測。試劑盒體系經(jīng)過專項(xiàng)優(yōu)化，可有效規(guī)避腸道雜菌、食物殘?jiān)葮颖倦s質(zhì)的干擾，檢測結(jié)果穩(wěn)定可靠。能夠快速甄別牛腸杯狀病毒引發(fā)的牛消化道腹瀉、腸炎病癥，適用于規(guī)模化牛場疫病監(jiān)測、病例確診及畜禽腸道病毒流行病學(xué)調(diào)研工作。
產(chǎn)品名稱 | 牛腸杯狀病毒PCR檢測試劑盒 | 貨號 | YS-P013930 |
英文名稱 | Bovine Enteric Calicivirus（BECV）RTPCR | 規(guī)格 | 50T |
有效期 | 12個月 | 保存 | -20℃保存 |
基礎(chǔ)原理：
提取糞便樣本病毒 RNA，Oligo 引物靶向牛腸杯狀病毒衣殼保守區(qū)，RT-PCR 將 RNA 反轉(zhuǎn)錄為 cDNA 后擴(kuò)增，熒光探針實(shí)時捕捉擴(kuò)增信號判斷病毒存在。
巢式 PCR 雙重?cái)U(kuò)增，第一輪廣譜引物擴(kuò)增杯狀病毒同源片段，第二輪型特異性引物擴(kuò)增牛腸杯狀病毒特有基因，電泳條帶實(shí)現(xiàn)分型檢出。
染料法實(shí)時熒光 PCR，SYBR Green 染料嵌入擴(kuò)增雙鏈 DNA 產(chǎn)生熒光，依據(jù)熔解曲線峰值溫度區(qū)分牛腸杯狀病毒與其他腸道病毒，排除交叉干擾。
?操作步驟?：
樣本制備：
使用CTAB法或商業(yè)DNA提取試劑盒從組織中提取基因組DNA。
建議DNA濃度≥20 ng/μL，A260/A280比值1.8~2.0。
反應(yīng)體系配制（20 μL體系示例）：
預(yù)混PCR Master Mix（含染料、dNTPs、Taq酶等）
特異性引物混合液
模板DNA（2~5 μL）
補(bǔ)充無核酸酶水至終體積。
PCR擴(kuò)增程序：
預(yù)變性：95℃ 5分鐘；
循環(huán)階段（40~45 cycles）：95℃ 10秒 → 60℃ 30秒（采集熒光信號）；
熔解曲線分析：60~95℃（可選，用于驗(yàn)證擴(kuò)增特異性）。
結(jié)果判讀：
陽性：Ct值≤35且熔解曲線峰單一；
陰性：Ct值≥40或無擴(kuò)增曲線；
可疑：35<Ct值<40，建議復(fù)測或結(jié)合熔解曲線分析。
?注意事項(xiàng)?：
所有耗材必須無核酸酶，吸頭一次性使用，禁止重復(fù)吸?。?/span>
陽性模板拷貝濃度高，開蓋操作輕柔，避免氣溶膠擴(kuò)散造成全域污染；
試劑融化后冰上放置不超過 2 h，用完立即放回 - 20℃；
廢棄 PCR 管、擴(kuò)增產(chǎn)物、實(shí)驗(yàn)廢液統(tǒng)一 121℃高壓滅菌后丟棄；
試劑盒僅用于動植物、水產(chǎn)、微生物疫病科研檢測，禁止人體臨床檢測；
移液器、操作臺定期紫外消毒，長期污染需更換全新試劑盒全套試劑。
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