本試劑盒采用通用型引物設(shè)計(jì)，可廣譜覆蓋豬輪狀病毒各亞型毒株核酸檢測(cè)，突破亞型限制，實(shí)現(xiàn)一株多檢的快速篩查效果。產(chǎn)品檢測(cè)靈敏度高，可精準(zhǔn)識(shí)別輕癥、隱性感染樣本，反應(yīng)體系穩(wěn)定，適配各類豬臨床腹瀉樣本。主要用于豬輪狀病毒各類亞型感染的全面排查、散發(fā)病例確診、豬場(chǎng)病毒凈化及輪狀病毒病原變異監(jiān)測(cè)與科研分析。
產(chǎn)品名稱 | 豬輪狀病毒通用PCR檢測(cè)試劑盒 | 貨號(hào) | YS-P014622 |
英文名稱 | Porcine rotavirus RTPCR | 規(guī)格 | 50T |
有效期 | 12個(gè)月 | 保存 | -20℃保存 |
基礎(chǔ)原理：
裂解糞便樣本釋放輪狀病毒核酸，去除腸道菌群干擾物質(zhì)后反轉(zhuǎn)錄 RNA。
選用輪狀病毒全毒株高度保守基因片段設(shè)計(jì)引物，覆蓋不同亞型輪狀病毒。
通過熒光擴(kuò)增結(jié)果定性樣本是否存在輪狀病毒，不細(xì)分具體群別，適合快速初篩。
?操作步驟?：
1. DNA提?。颖局苽鋮^(qū)）
使用自選方法或兼容試劑盒提取樣本DNA，建議濃度≥10 ng/μL，A260/A280比值1.8-2.0。
2. 標(biāo)準(zhǔn)曲線制備（獨(dú)立操作區(qū)）
標(biāo)記6管為梯度稀釋點(diǎn)（如7-2），每管加45 μL DEPC水。
取5 μL陽性對(duì)照依次稀釋，混勻后作為標(biāo)準(zhǔn)品（避免污染）。
3. PCR反應(yīng)體系配制（試劑配制區(qū)）
按以下比例配制（示例）：
| 組分 | 體積（μL） |
| 2× Master Mix | 10 |
| 引物混合液 | 2 |
| DNA模板 | 2 |
| DEPC水 | 6 |
4. 上機(jī)檢測(cè)
程序設(shè)置：預(yù)變性95℃ 3 min；40循環(huán)（95℃ 10 s, 60℃ 30 s）；熔解曲線分析。
數(shù)據(jù)分析：根據(jù)Ct值及標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣本濃度。
?注意事項(xiàng)?：
試劑盒含生物源性質(zhì)粒模板，操作全程佩戴手套、口罩，陽性模板僅在生物安全柜開蓋；
所有一次性耗材、PCR 廢液、電泳凝膠實(shí)驗(yàn)后 121℃高壓滅菌再丟棄；
試劑避免反復(fù)凍融，單次融化冰上放置不超過 2 h，使用完畢立即放回 - 20℃；
移液器吸頭一次性使用，禁止重復(fù)吸取，防止交叉污染；
試劑盒僅用于科研檢測(cè)，嚴(yán)禁人臨床體外診斷；
擴(kuò)增產(chǎn)物區(qū)產(chǎn)物不可帶回試劑、提取區(qū)，防止氣溶膠大面積污染實(shí)驗(yàn)室；
若陰性對(duì)照持續(xù)出現(xiàn)雜帶，全部更換全新試劑盒，實(shí)驗(yàn)室臺(tái)面、移液器紫外過夜消毒。
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