本試劑盒采用變形桿菌屬通用保守基因設(shè)計(jì)廣譜擴(kuò)增體系,可一次性檢測變形桿菌屬各類常見致病菌種,實(shí)現(xiàn)屬級病原快速篩查,適配批量樣本檢測需求。試劑盒擴(kuò)增效率穩(wěn)定、無交叉反應(yīng),可有效區(qū)分變形桿菌與其他腸道致病菌。主要用于畜禽腸道菌群紊亂、細(xì)菌性感染疫病的初篩、養(yǎng)殖環(huán)境致病菌普查、混合感染病例病原排查。
產(chǎn)品名稱 | 變形桿菌屬通用PCR檢測試劑盒 | 貨號 | YS-P014639 |
英文名稱 | Proteus spp.PCR | 規(guī)格 | 50T |
有效期 | 12個月 | 保存 | -20℃保存 |
基礎(chǔ)原理:

提取臨床樣本總細(xì)菌 DNA,純化后作為 PCR 模板。
引物針對變形桿菌屬 16S rRNA 保守區(qū)設(shè)計(jì),可檢出屬內(nèi)各類變形桿菌。
擴(kuò)增陽性僅確認(rèn)變形桿菌屬存在,不做具體菌種分型。
?操作步驟?:

DNA提?。颖局苽鋮^(qū))
使用自選方法或兼容的核酸提取試劑盒純化樣本DNA,確保無抑制劑殘留。
標(biāo)準(zhǔn)曲線制備(樣本制備區(qū))
標(biāo)記6支離心管為7至2號,每管加入45 μL DEPC-H2O(需使用帶濾芯槍頭)。
梯度稀釋陽性對照:
7號管:加入5 μL 1×10^8拷貝/μL陽性對照,震蕩混勻,得1×10^7拷貝/μL標(biāo)準(zhǔn)品;
依次稀釋至2號管,最終濃度跨5個數(shù)量級(1×10^7至1×10^3拷貝/μL)。
所有標(biāo)準(zhǔn)品置于冰上備用,避免反復(fù)凍融。
試劑配制(試劑準(zhǔn)備區(qū))
反應(yīng)液避光解凍后渦旋混勻,短暫離心分裝至PCR管。
每反應(yīng)體系20 μL,含預(yù)混引物、熒光染料及緩沖液。
加樣(樣本處理區(qū))
分別加入5 μL待測DNA或標(biāo)準(zhǔn)品至反應(yīng)管,陰性對照以DEPC-H2O替代。
蓋緊管蓋,避免氣泡干擾。
PCR擴(kuò)增(核酸擴(kuò)增區(qū))
按以下程序運(yùn)行定量PCR儀:
預(yù)變性:95℃ 2分鐘;
循環(huán)階段(40次):95℃ 15秒 → 60℃ 30秒(采集熒光信號);
熔解曲線分析(可選)。
?注意事項(xiàng)?:

試劑盒含生物源性質(zhì)粒模板,操作全程佩戴手套、口罩,陽性模板僅在生物安全柜開蓋;
所有一次性耗材、PCR 廢液、電泳凝膠實(shí)驗(yàn)后 121℃高壓滅菌再丟棄;
試劑避免反復(fù)凍融,單次融化冰上放置不超過 2 h,使用完畢立即放回 - 20℃;
移液器吸頭一次性使用,禁止重復(fù)吸取,防止交叉污染;
試劑盒僅用于科研檢測,嚴(yán)禁人臨床體外診斷;
擴(kuò)增產(chǎn)物區(qū)產(chǎn)物不可帶回試劑、提取區(qū),防止氣溶膠大面積污染實(shí)驗(yàn)室;
若陰性對照持續(xù)出現(xiàn)雜帶,全部更換全新試劑盒,實(shí)驗(yàn)室臺面、移液器紫外過夜消毒。
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