本試劑盒特異性靶向惡臭假單胞菌保守基因序列，可精準(zhǔn)檢測樣本中該致病菌核酸，專一性區(qū)分假單胞菌屬其他菌種。試劑盒檢測下限低、靈敏度優(yōu)異，可檢出低濃度致病菌樣本，適配養(yǎng)殖環(huán)境、畜禽組織、分泌物等樣本。主要用于畜禽惡臭假單胞菌感染病例診斷、養(yǎng)殖環(huán)境致病菌污染篩查、水質(zhì)微生物安全檢測及相關(guān)病原研究。
產(chǎn)品名稱 | 惡臭假單胞菌PCR檢測試劑盒 | 貨號 | YS-P014651 |
英文名稱 | Pseudomonas putidaPCR | 規(guī)格 | 50T |
有效期 | 12個月 | 保存 | -20℃保存 |
基礎(chǔ)原理：
純化待檢樣本細(xì)菌核酸，去除腐殖質(zhì)等 PCR 抑制物。
引物靶向惡臭假單胞菌特異性代謝相關(guān)基因，種識別精準(zhǔn)。
實(shí)時 PCR 擴(kuò)增判讀 Ct 值，完成該菌種核酸檢測。
?操作步驟?：
（一）反應(yīng)體系配制（冰上操作，防酶失活與污染）
按 “水→緩沖液→dNTP→引物→模板→Taq 酶” 順序加樣（酶最后加，避免失活）。
輕輕渦旋混勻，短暫離心（3000rpm，10s），使液體沉至管底。
無熱蓋的 PCR 儀：加 1 滴礦物油覆蓋液面，防止蒸發(fā)。
（二）PCR 程序設(shè)置（標(biāo)準(zhǔn) 35 循環(huán)）
預(yù)變性：94℃，3-5min（徹底變性模板 DNA）。
循環(huán)階段（35 次）：
變性：94℃，30s（雙鏈解鏈）。
退火：55-65℃，30s（引物結(jié)合模板，按引物 Tm 值調(diào)整）。
延伸：72℃，1min/kb（Taq 酶合成新鏈，1kb 片段約 1min）。
終延伸：72℃，5-10min（確保片段完整延伸）。
保溫：4℃，∞（防止非特異性復(fù)性，短期保存）。
（三）產(chǎn)物檢測（瓊脂糖凝膠電泳）
制膠：1% 瓊脂糖凝膠（1g 瓊脂糖 + 100mL 1×TAE 緩沖液），加熱融化后加核酸染料，倒膠插梳，凝固 30min。
上樣：取 5μL PCR 產(chǎn)物 + 1μL 上樣緩沖液，點(diǎn)樣；同時加 DNA Marker（分子量對照）。
電泳：120V，20-30min，至溴酚藍(lán)遷移至凝膠 2/3 處。
成像：凝膠成像系統(tǒng)觀察條帶，目標(biāo)片段位置與預(yù)期一致則為陽性。
四、參數(shù)優(yōu)化
退火溫度（Tm）：引物 Tm 值 = 4×(G+C)+2×(A+T)，退火溫度一般低于 Tm 值 5℃，溫度過高無條帶，過低非特異性條帶多。
Mg2?濃度：1.5-2.5mM，濃度過低酶活性低、產(chǎn)量少；過高非特異性擴(kuò)增增加。
循環(huán)數(shù)：25-35 個循環(huán)，少于 25 個產(chǎn)物不足，多于 35 個易出現(xiàn)非特異性條帶。
延伸時間：按目標(biāo)片段長度調(diào)整，≤1kb 用 1min，1-3kb 用 2-3min。
?注意事項(xiàng)?：
試劑禁止反復(fù)凍融，分裝為小體積 - 20℃保存，融化后冰上放置不超過 2 h
所有耗材必須無 DNase/RNase，吸頭一次性使用，廢液、廢棄 PCR 管 121℃高壓滅菌后丟棄
陽性質(zhì)粒高拷貝，開蓋全程在生物安全柜操作，防止氣溶膠污染實(shí)驗(yàn)室
試劑盒僅限科研檢測，禁止人、臨床樣本檢測
試劑盒過期、試劑渾濁、變色禁止使用
若大量樣本出現(xiàn)陰性對照帶污染，立即更換全新試劑盒，徹底紫外消毒實(shí)驗(yàn)臺面、移液器
公司正在出售的產(chǎn)品：
麝源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒 | 黃熱病毒（YFV）核酸檢測試劑盒 | 人神經(jīng)降壓素(NT) ELISA檢測試劑盒 |
神經(jīng)肉孢子蟲探針法熒光定量PCR試劑盒 | 禽流感病毒H5/H7亞型(AIV-H5/H7)核酸檢測試劑盒 | 人抗Sa抗體(anti-Sa-Ab) ELISA檢測試劑盒 |
十二指腸鉤口線蟲探針法熒光定量PCR試劑盒 | 豬藍(lán)耳病毒歐洲株/美洲株/高致病株檢測試劑盒（三重?zé)晒釶CR法） | 人黑色素瘤標(biāo)記物(MART/Melan-A)ELISA Kit |
嗜冷黃桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒 | 呼吸道合胞病毒A 型（RSV-A）核酸檢測試劑盒 | 人胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白4(IGFBP-4)ELISA試劑盒 |
絲狀支原體絲狀亞種型探針法熒光定量PCR試劑盒 | 兔源性成分(Rabbit)核酸檢測試劑盒 | 人胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白3(IGFBP-3)試劑盒 ELISA |
鼠疫耶爾森菌(鼠疫桿菌)探針法熒光定量PCR試劑盒 | 轉(zhuǎn)基因大豆MON87705品系核酸檢測試劑盒 | 人神經(jīng)髓鞘蛋白(p2) ELISA試劑盒 |
水痘RT-帶狀皰疹病毒探針法熒光定量PCR試劑盒 | 鵝源性成分(Goose)核酸檢測試劑盒 | 惡臭假單胞菌PCR檢測試劑盒人白介素10(IL-10) ELISA Kit |
水牛正痘病毒探針法熒光定量PCR試劑盒 | 豬鏈球菌2型/副豬嗜血桿菌/傳染性胸膜肺炎放線桿菌（SS-2/HPS/APP）核酸檢測試劑盒 | 人胸腺白血病抗原(TLa) ELISA檢測試劑盒 |
獸疫鏈球菌探針法熒光定量PCR試劑盒 | 玉米內(nèi)源基因IVR核酸檢測試劑盒 | 人細(xì)胞角蛋白19(CK-19) ELISA Kit |
關(guān)鍵字： 惡臭假單胞菌;PCR檢測試劑盒;
上海研生實(shí)業(yè)有限公司成立于2011年專業(yè)銷售各種科學(xué)實(shí)驗(yàn)產(chǎn)品，包括分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、免疫學(xué)、等多個研究及應(yīng)用領(lǐng)域。旗下有“上研生"品牌。
我們努力將歐美進(jìn)口品牌的產(chǎn)品推薦給各類研究人員；另一方面也非常重視國內(nèi)科研市場的產(chǎn)品開發(fā)，推出了一系列具有競爭力的產(chǎn)品和服務(wù)。
同時國家對于生物行業(yè)的發(fā)展給予極大的重視，更多地側(cè)重于科研的投入。公司的服務(wù)和業(yè)務(wù)在同行獲得認(rèn)可。也具備豐富的管理經(jīng)驗(yàn)，同時我們建立了集技術(shù)支持、售后服務(wù)等多方位的服務(wù)體系。我們有激情、有理想，更有責(zé)任感，是您科研道路上值得信賴的伙伴。
公司的理念是：以誠信為本，努力打造優(yōu)質(zhì)品牌，為您提供產(chǎn)品的售中、售后服務(wù)。