本試劑盒針對綠膿假單胞菌（銅綠假單胞菌）特異性保守基因設(shè)計(jì)擴(kuò)增引物，可精準(zhǔn)定性檢測樣本中的致病菌核酸，特異性強(qiáng)，可區(qū)分假單胞菌屬其他菌種。試劑盒抗復(fù)雜樣本干擾能力優(yōu)異，適配畜禽呼吸道、創(chuàng)面、環(huán)境樣本，檢測快速、靈敏度高。主要用于畜禽綠膿假單胞菌引發(fā)的呼吸道感染、創(chuàng)面感染、敗血癥等疫病的臨床診斷及環(huán)境病原監(jiān)測。
產(chǎn)品名稱 | 綠膿假單胞菌PCR檢測試劑盒 | 貨號 | YS-P014649 |
英文名稱 | Pseudomonas aeruginosaPCR | 規(guī)格 | 50T |
有效期 | 12個(gè)月 | 保存 | -20℃保存 |
基礎(chǔ)原理：
采集創(chuàng)面、痰液樣本，裂解菌體提取細(xì)菌 DNA。
引物靶向綠膿假單胞菌（銅綠假單胞菌）toxA 毒力基因，特異性強(qiáng)。
熒光定量 PCR 擴(kuò)增檢測樣本中該條件致病菌核酸。
?操作步驟?：
DNA提取（樣本制備區(qū)）
使用自選方法或兼容的核酸提取試劑盒純化樣本DNA，確保無抑制劑殘留。
標(biāo)準(zhǔn)曲線制備（樣本制備區(qū)）
標(biāo)記6支離心管為7至2號，每管加入45 μL DEPC-H2O（需使用帶濾芯槍頭）。
梯度稀釋陽性對照：
7號管：加入5 μL 1×10^8拷貝/μL陽性對照，震蕩混勻，得1×10^7拷貝/μL標(biāo)準(zhǔn)品；
依次稀釋至2號管，最終濃度跨5個(gè)數(shù)量級（1×10^7至1×10^3拷貝/μL）。
所有標(biāo)準(zhǔn)品置于冰上備用，避免反復(fù)凍融。
試劑配制（試劑準(zhǔn)備區(qū)）
反應(yīng)液避光解凍后渦旋混勻，短暫離心分裝至PCR管。
每反應(yīng)體系20 μL，含預(yù)混引物、熒光染料及緩沖液。
加樣（樣本處理區(qū)）
分別加入5 μL待測DNA或標(biāo)準(zhǔn)品至反應(yīng)管，陰性對照以DEPC-H2O替代。
蓋緊管蓋，避免氣泡干擾。
PCR擴(kuò)增（核酸擴(kuò)增區(qū)）
按以下程序運(yùn)行定量PCR儀：
預(yù)變性：95℃ 2分鐘；
循環(huán)階段（40次）：95℃ 15秒 → 60℃ 30秒（采集熒光信號）；
熔解曲線分析（可選）。
?注意事項(xiàng)?：
所有試劑避免反復(fù)凍融，可分裝小體積凍存；融化后冰上放置不超過 2 h，酶失活會(huì)直接導(dǎo)致無擴(kuò)增條帶
陽性質(zhì)?？截悢?shù)極高，開蓋全程在生物安全柜操作，防止氣溶膠污染實(shí)驗(yàn)室
所有耗材必須無核酸酶，槍頭一次性使用；實(shí)驗(yàn)后 PCR 管、廢液 121℃高壓滅菌后丟棄
試劑盒出現(xiàn)渾濁、變色、結(jié)冰分層、過期禁止使用
僅限科研檢測，嚴(yán)禁用于人體臨床疾病診斷、食品出廠檢疫等合規(guī)檢測場景
土壤、糞便、腐殖質(zhì)樣本優(yōu)先使用磁珠法提取核酸，減少抑制劑干擾
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