?產(chǎn)品名稱：多殺巴斯德菌PCR檢測(cè)試劑盒
英文名稱：Pasteurella multocidaPCR
貨號(hào)：YS-P014563
分類：PCR檢測(cè)試劑盒
規(guī)格?：50T/盒
檢測(cè)原理：
裂解細(xì)菌細(xì)胞壁提取基因組 DNA，靶標(biāo)選用多殺巴斯德菌種特異性 toxA 毒力基因設(shè)計(jì)上下游引物。
嚴(yán)格設(shè)置退火溫度限制非特異性結(jié)合，僅多殺巴斯德菌模板可被引物識(shí)別并啟動(dòng)擴(kuò)增。
檢測(cè)擴(kuò)增片段，出現(xiàn)預(yù)期大小產(chǎn)物即可判定樣本感染多殺巴斯德菌。
實(shí)驗(yàn)流程：
樣本制備：
使用CTAB法或商業(yè)DNA提取試劑盒從組織中提取基因組DNA。
建議DNA濃度≥20 ng/μL，A260/A280比值1.8~2.0。
反應(yīng)體系配制（20 μL體系示例）：
預(yù)混PCR Master Mix（含染料、dNTPs、Taq酶等）
特異性引物混合液
模板DNA（2~5 μL）
補(bǔ)充無核酸酶水至終體積。
PCR擴(kuò)增程序：
預(yù)變性：95℃ 5分鐘；
循環(huán)階段（40~45 cycles）：95℃ 10秒 → 60℃ 30秒（采集熒光信號(hào)）；
熔解曲線分析：60~95℃（可選，用于驗(yàn)證擴(kuò)增特異性）。
結(jié)果判讀：
陽性：Ct值≤35且熔解曲線峰單一；
陰性：Ct值≥40或無擴(kuò)增曲線；
可疑：35<Ct值<40，建議復(fù)測(cè)或結(jié)合熔解曲線分析。
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注意事項(xiàng)：
分區(qū)操作：試劑配制、樣品處理、PCR擴(kuò)增需在獨(dú)立區(qū)域進(jìn)行，避免交叉污染
無菌操作：使用帶濾芯槍頭、一次性手套和專用工作服
試劑準(zhǔn)備：所有試劑使用前需完全融化，震蕩混勻后短暫離心
避光保存：含熒光探針的試劑需避光保存和操作
防止污染：陽性對(duì)照操作需最后進(jìn)行，實(shí)驗(yàn)后用10%次氯酸或75%酒精消毒工作臺(tái)
關(guān)鍵字： 多殺巴斯德菌;PCR檢測(cè)試劑盒;
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