本試劑盒采用特異性PCR擴(kuò)增技術(shù),針對羅斯河病毒保守基因研發(fā)檢測體系,可快速精準(zhǔn)檢出樣本中的病毒核酸。羅斯河病毒為蚊媒傳播病毒,主要引發(fā)人體關(guān)節(jié)炎、發(fā)熱等癥狀,地域性傳播特征明顯,本試劑盒檢出下限低、重復(fù)性好,適用于疫區(qū)人群感染篩查、蚊蟲媒介病原監(jiān)測、跨境疫病防控及病毒流行特征研究。
產(chǎn)品名稱 | 羅斯河病毒PCR檢測試劑盒 | 貨號 | YS-P014691 |
英文名稱 | Ross River Virus(RRV)RTPCR | 規(guī)格 | 50T |
有效期 | 12個月 | 保存 | -20℃保存 |
基礎(chǔ)原理:

引物針對羅斯河病毒 E2 蛋白基因保守序列設(shè)計,特異性擴(kuò)增病毒核酸。
對樣本病毒 RNA 進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄得到 cDNA,再通過 PCR 循環(huán)擴(kuò)增目標(biāo)片段。
根據(jù) PCR 擴(kuò)增結(jié)果檢測宿主是否感染羅斯河病毒。
?操作步驟?:

DNA提?。颖局苽鋮^(qū))
使用自選方法或兼容的核酸提取試劑盒純化樣本DNA,確保無抑制劑殘留。
標(biāo)準(zhǔn)曲線制備(樣本制備區(qū))
標(biāo)記6支離心管為7至2號,每管加入45 μL DEPC-H2O(需使用帶濾芯槍頭)。
梯度稀釋陽性對照:
7號管:加入5 μL 1×10^8拷貝/μL陽性對照,震蕩混勻,得1×10^7拷貝/μL標(biāo)準(zhǔn)品;
依次稀釋至2號管,最終濃度跨5個數(shù)量級(1×10^7至1×10^3拷貝/μL)。
所有標(biāo)準(zhǔn)品置于冰上備用,避免反復(fù)凍融。
試劑配制(試劑準(zhǔn)備區(qū))
反應(yīng)液避光解凍后渦旋混勻,短暫離心分裝至PCR管。
每反應(yīng)體系20 μL,含預(yù)混引物、熒光染料及緩沖液。
加樣(樣本處理區(qū))
分別加入5 μL待測DNA或標(biāo)準(zhǔn)品至反應(yīng)管,陰性對照以DEPC-H2O替代。
蓋緊管蓋,避免氣泡干擾。
PCR擴(kuò)增(核酸擴(kuò)增區(qū))
按以下程序運(yùn)行定量PCR儀:
預(yù)變性:95℃ 2分鐘;
循環(huán)階段(40次):95℃ 15秒 → 60℃ 30秒(采集熒光信號);
熔解曲線分析(可選)。
?注意事項?:

所有試劑避免反復(fù)凍融,可分裝小體積凍存;融化后冰上放置不超過 2 h,酶失活會直接導(dǎo)致無擴(kuò)增條帶
陽性質(zhì)??截悢?shù)極高,開蓋全程在生物安全柜操作,防止氣溶膠污染實驗室
所有耗材必須無核酸酶,槍頭一次性使用;實驗后 PCR 管、廢液 121℃高壓滅菌后丟棄
試劑盒出現(xiàn)渾濁、變色、結(jié)冰分層、過期禁止使用
僅限科研檢測,嚴(yán)禁用于人體臨床疾病診斷、食品出廠檢疫等合規(guī)檢測場景
土壤、糞便、腐殖質(zhì)樣本優(yōu)先使用磁珠法提取核酸,減少抑制劑干擾
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