?產(chǎn)品名稱:鼠傷寒沙門氏菌PCR檢測(cè)試劑盒
英文名稱:Salmonella typhimuriumPCR
貨號(hào):YS-P014719
分類:PCR檢測(cè)試劑盒
規(guī)格?:50T/盒
檢測(cè)原理:
靶向鼠傷寒沙門氏菌侵襲相關(guān)特異基因設(shè)計(jì)引物,精準(zhǔn)區(qū)分該菌株與其他常見沙門氏菌。
依靠 Taq 酶催化 DNA 子鏈合成,循環(huán)擴(kuò)增提升低載量樣本的檢出能力。
通過對(duì)照體系排除假陽(yáng)性、假陰性結(jié)果,依據(jù)擴(kuò)增產(chǎn)物判定樣本是否攜帶鼠傷寒沙門氏菌。
實(shí)驗(yàn)流程:
DNA提?。颖局苽鋮^(qū))
使用自選方法或兼容的核酸提取試劑盒純化樣本DNA,確保無抑制劑殘留。
標(biāo)準(zhǔn)曲線制備(樣本制備區(qū))
標(biāo)記6支離心管為7至2號(hào),每管加入45 μL DEPC-H2O(需使用帶濾芯槍頭)。
梯度稀釋陽(yáng)性對(duì)照:
7號(hào)管:加入5 μL 1×10^8拷貝/μL陽(yáng)性對(duì)照,震蕩混勻,得1×10^7拷貝/μL標(biāo)準(zhǔn)品;
依次稀釋至2號(hào)管,最終濃度跨5個(gè)數(shù)量級(jí)(1×10^7至1×10^3拷貝/μL)。
所有標(biāo)準(zhǔn)品置于冰上備用,避免反復(fù)凍融。
試劑配制(試劑準(zhǔn)備區(qū))
反應(yīng)液避光解凍后渦旋混勻,短暫離心分裝至PCR管。
每反應(yīng)體系20 μL,含預(yù)混引物、熒光染料及緩沖液。
加樣(樣本處理區(qū))
分別加入5 μL待測(cè)DNA或標(biāo)準(zhǔn)品至反應(yīng)管,陰性對(duì)照以DEPC-H2O替代。
蓋緊管蓋,避免氣泡干擾。
PCR擴(kuò)增(核酸擴(kuò)增區(qū))
按以下程序運(yùn)行定量PCR儀:
預(yù)變性:95℃ 2分鐘;
循環(huán)階段(40次):95℃ 15秒 → 60℃ 30秒(采集熒光信號(hào));
熔解曲線分析(可選)。
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注意事項(xiàng):
分區(qū)操作:試劑配制、樣品處理、PCR擴(kuò)增需在獨(dú)立區(qū)域進(jìn)行,避免交叉污染
無菌操作:使用帶濾芯槍頭、一次性手套和專用工作服
試劑準(zhǔn)備:所有試劑使用前需完全融化,震蕩混勻后短暫離心
避光保存:含熒光探針的試劑需避光保存和操作
防止污染:陽(yáng)性對(duì)照操作需最后進(jìn)行,實(shí)驗(yàn)后用10%次氯酸或75%酒精消毒工作臺(tái)
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