?產(chǎn)品名稱:不明血吸蟲PCR檢測(cè)試劑盒
英文名稱:Schistosoma incognitumPCR
貨號(hào):YS-P014731
分類:PCR檢測(cè)試劑盒
規(guī)格?:50T/盒
檢測(cè)原理:
引物靶向血吸蟲屬保守基因,可擴(kuò)增各類血吸蟲共有核酸序列,適用于未知血吸蟲初篩。
以樣本 DNA 為模板進(jìn)行 PCR 擴(kuò)增,先確認(rèn)是否存在血吸蟲屬寄生蟲核酸。
后續(xù)可配合測(cè)序進(jìn)一步鑒定具體血吸蟲種類,試劑盒僅完成屬層面篩查。
實(shí)驗(yàn)流程:
樣本制備:
使用CTAB法或商業(yè)DNA提取試劑盒從組織中提取基因組DNA。
建議DNA濃度≥20 ng/μL,A260/A280比值1.8~2.0。
反應(yīng)體系配制(20 μL體系示例):
預(yù)混PCR Master Mix(含染料、dNTPs、Taq酶等)
特異性引物混合液
模板DNA(2~5 μL)
補(bǔ)充無(wú)核酸酶水至終體積。
PCR擴(kuò)增程序:
預(yù)變性:95℃ 5分鐘;
循環(huán)階段(40~45 cycles):95℃ 10秒 → 60℃ 30秒(采集熒光信號(hào));
熔解曲線分析:60~95℃(可選,用于驗(yàn)證擴(kuò)增特異性)。
結(jié)果判讀:
陽(yáng)性:Ct值≤35且熔解曲線峰單一;
陰性:Ct值≥40或無(wú)擴(kuò)增曲線;
可疑:35<Ct值<40,建議復(fù)測(cè)或結(jié)合熔解曲線分析。
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注意事項(xiàng):
分區(qū)操作:試劑配制、樣品處理、PCR擴(kuò)增需在獨(dú)立區(qū)域進(jìn)行,避免交叉污染
無(wú)菌操作:使用帶濾芯槍頭、一次性手套和專用工作服
試劑準(zhǔn)備:所有試劑使用前需完全融化,震蕩混勻后短暫離心
避光保存:含熒光探針的試劑需避光保存和操作
防止污染:陽(yáng)性對(duì)照操作需最后進(jìn)行,實(shí)驗(yàn)后用10%次氯酸或75%酒精消毒工作臺(tái)
關(guān)鍵字: 不明血吸蟲;PCR檢測(cè)試劑盒;
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