本試劑盒針對(duì)所有旋毛蟲屬物種共有保守核酸序列設(shè)計(jì)通用PCR擴(kuò)增體系，可一次性篩查各類樣本中的布氏旋毛蟲、米氏旋毛蟲、偽旋毛蟲等所有旋毛蟲病原。試劑盒通用性強(qiáng)、篩查效率高，適合批量樣本初篩，特異性不與其他寄生蟲交叉反應(yīng)，適用于肉類批量檢疫、養(yǎng)殖場(chǎng)常態(tài)化寄生蟲篩查、公共衛(wèi)生食品安全監(jiān)測(cè)。
產(chǎn)品名稱 | 旋毛蟲通用PCR檢測(cè)試劑盒 | 貨號(hào) | YS-P014857 |
英文名稱 | Trichinella spp.PCR | 規(guī)格 | 50T |
有效期 | 12個(gè)月 | 保存 | -20℃保存 |
基礎(chǔ)原理：
提取樣本中所有旋毛蟲蟲體的總基因組 DNA，去除組織抑制成分；
引物選取旋毛蟲屬所有物種共有的保守基因進(jìn)行廣譜擴(kuò)增；
可先篩查樣本是否存在旋毛蟲感染，后續(xù)再開展具體蟲種分型。
?操作步驟?：
樣本制備：
使用CTAB法或商業(yè)DNA提取試劑盒從組織中提取基因組DNA。
建議DNA濃度≥20 ng/μL，A260/A280比值1.8~2.0。
反應(yīng)體系配制（20 μL體系示例）：
預(yù)混PCR Master Mix（含染料、dNTPs、Taq酶等）
特異性引物混合液
模板DNA（2~5 μL）
補(bǔ)充無核酸酶水至終體積。
PCR擴(kuò)增程序：
預(yù)變性：95℃ 5分鐘；
循環(huán)階段（40~45 cycles）：95℃ 10秒 → 60℃ 30秒（采集熒光信號(hào)）；
熔解曲線分析：60~95℃（可選，用于驗(yàn)證擴(kuò)增特異性）。
結(jié)果判讀：
陽性：Ct值≤35且熔解曲線峰單一；
陰性：Ct值≥40或無擴(kuò)增曲線；
可疑：35<Ct值<40，建議復(fù)測(cè)或結(jié)合熔解曲線分析。
?注意事項(xiàng)?：
分區(qū)操作：試劑配制、樣品處理、PCR擴(kuò)增需在獨(dú)立區(qū)域進(jìn)行，避免交叉污染
無菌操作：使用帶濾芯槍頭、一次性手套和專用工作服
試劑準(zhǔn)備：所有試劑使用前需完全融化，震蕩混勻后短暫離心
避光保存：含熒光探針的試劑需避光保存和操作
防止污染：陽性對(duì)照操作需最后進(jìn)行，實(shí)驗(yàn)后用10%次氯酸或75%酒精消毒工作臺(tái)
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