?產(chǎn)品名稱:阿爾萊特葡萄球菌PCR檢測(cè)試劑盒
英文名稱:Staphylococcus arlettaePCR
貨號(hào):YS-P014764
分類:PCR檢測(cè)試劑盒
規(guī)格?:50T/盒
檢測(cè)原理:
引物特異性匹配阿爾萊特葡萄球菌 nuc 基因獨(dú)有序列,不與其他葡萄球菌菌種核酸發(fā)生交叉擴(kuò)增。
從臨床 / 環(huán)境樣本中提取細(xì)菌基因組 DNA 作為模板,在 Taq 酶催化下完成靶基因片段的指數(shù)擴(kuò)增。
通過熔解曲線分析擴(kuò)增產(chǎn)物 Tm 值,依靠專屬熔解溫度確認(rèn)是否為本種細(xì)菌。
實(shí)驗(yàn)流程:
樣本處理(樣本處理區(qū))
推薦使用磁珠法或離心柱法提取核酸,避免交叉污染。
試劑配制(試劑準(zhǔn)備區(qū))
反應(yīng)體系(20μL/管):19μL反應(yīng)液 + 1μL酶液,分裝后加入5μL待測(cè)核酸或質(zhì)控品。
PCR擴(kuò)增(核酸擴(kuò)增區(qū))
循環(huán)參數(shù):
預(yù)變性:95℃ 2min(1循環(huán));
擴(kuò)增:95℃ 15sec → 60℃ 30sec(45循環(huán),60℃時(shí)采集熒光信號(hào),F(xiàn)AM通道)。
結(jié)果分析
陽性:Ct值≤40,擴(kuò)增曲線呈指數(shù)增長(zhǎng);
陰性:無Ct值或曲線平直;
可疑:40<Ct≤45,需復(fù)測(cè)確認(rèn)。
質(zhì)控要求:陽性質(zhì)控Ct≤32,陰性質(zhì)控?zé)o擴(kuò)增。
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注意事項(xiàng):
所有試劑避免反復(fù)凍融,可分裝小體積凍存;融化后冰上放置不超過 2 h,酶失活會(huì)直接導(dǎo)致無擴(kuò)增條帶
陽性質(zhì)粒拷貝數(shù)極高,開蓋全程在生物安全柜操作,防止氣溶膠污染實(shí)驗(yàn)室
所有耗材必須無核酸酶,槍頭一次性使用;實(shí)驗(yàn)后 PCR 管、廢液 121℃高壓滅菌后丟棄
試劑盒出現(xiàn)渾濁、變色、結(jié)冰分層、過期禁止使用
僅限科研檢測(cè),嚴(yán)禁用于人體臨床疾病診斷、食品出廠檢疫等合規(guī)檢測(cè)場(chǎng)景
土壤、糞便、腐殖質(zhì)樣本優(yōu)先使用磁珠法提取核酸,減少抑制劑干擾
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