本試劑盒基于特異性PCR擴(kuò)增技術(shù)，針對滴蟲屬微生物的高度保守核酸序列設(shè)計特異性引物，可精準(zhǔn)檢出各類常見滴蟲病原核酸，有效覆蓋不同滴蟲菌種的檢測需求。產(chǎn)品特異性強(qiáng)，不會與其他寄生原蟲、細(xì)菌、真菌等常見病原發(fā)生交叉反應(yīng)，檢測靈敏度高，能夠快速完成臨床樣本、動物樣本中的滴蟲病原篩查與輔助確診，適用于臨床檢驗、動物疫病監(jiān)測及流行病學(xué)調(diào)查等場景，操作簡便、檢測周期短，可高效適配批量樣本檢測工作。

基礎(chǔ)原理：

試劑盒內(nèi)含有針對滴蟲屬保守基因區(qū)段設(shè)計的特異性上下游引物，可對樣本中滴蟲核酸片段進(jìn)行特異性擴(kuò)增。

通過 Taq DNA 聚合酶在 PCR 循環(huán)中完成變性、退火、延伸三步反應(yīng)，使目標(biāo)核酸片段呈指數(shù)級大量復(fù)制。

擴(kuò)增產(chǎn)物可結(jié)合電泳或熒光信號判定，若出現(xiàn)對應(yīng)大小目的條帶 / 熒光信號，即可證明樣本存在滴蟲核酸。

?操作步驟?：

（一）反應(yīng)體系配制（冰上操作，防酶失活與污染）

按 “水→緩沖液→dNTP→引物→模板→Taq 酶” 順序加樣（酶最后加，避免失活）。

輕輕渦旋混勻，短暫離心（3000rpm，10s），使液體沉至管底。

無熱蓋的 PCR 儀：加 1 滴礦物油覆蓋液面，防止蒸發(fā)。

（二）PCR 程序設(shè)置（標(biāo)準(zhǔn) 35 循環(huán)）

預(yù)變性：94℃，3-5min（徹底變性模板 DNA）。

循環(huán)階段（35 次）：

變性：94℃，30s（雙鏈解鏈）。

退火：55-65℃，30s（引物結(jié)合模板，按引物 Tm 值調(diào)整）。

延伸：72℃，1min/kb（Taq 酶合成新鏈，1kb 片段約 1min）。

終延伸：72℃，5-10min（確保片段完整延伸）。

保溫：4℃，∞（防止非特異性復(fù)性，短期保存）。

（三）產(chǎn)物檢測（瓊脂糖凝膠電泳）

制膠：1% 瓊脂糖凝膠（1g 瓊脂糖 + 100mL 1×TAE 緩沖液），加熱融化后加核酸染料，倒膠插梳，凝固 30min。

上樣：取 5μL PCR 產(chǎn)物 + 1μL 上樣緩沖液，點樣；同時加 DNA Marker（分子量對照）。

電泳：120V，20-30min，至溴酚藍(lán)遷移至凝膠 2/3 處。

成像：凝膠成像系統(tǒng)觀察條帶，目標(biāo)片段位置與預(yù)期一致則為陽性。

四、參數(shù)優(yōu)化

退火溫度（Tm）：引物 Tm 值 = 4×(G+C)+2×(A+T)，退火溫度一般低于 Tm 值 5℃，溫度過高無條帶，過低非特異性條帶多。

Mg2?濃度：1.5-2.5mM，濃度過低酶活性低、產(chǎn)量少；過高非特異性擴(kuò)增增加。

循環(huán)數(shù)：25-35 個循環(huán)，少于 25 個產(chǎn)物不足，多于 35 個易出現(xiàn)非特異性條帶。

延伸時間：按目標(biāo)片段長度調(diào)整，≤1kb 用 1min，1-3kb 用 2-3min。

?注意事項?：

試劑禁止反復(fù)凍融，分裝為小體積 - 20℃保存，融化后冰上放置不超過 2 h

所有耗材必須無 DNase/RNase，吸頭一次性使用，廢液、廢棄 PCR 管 121℃高壓滅菌后丟棄

陽性質(zhì)粒高拷貝，開蓋全程在生物安全柜操作，防止氣溶膠污染實驗室

試劑盒僅限科研檢測，禁止人、臨床樣本檢測

試劑盒過期、試劑渾濁、變色禁止使用

若大量樣本出現(xiàn)陰性對照帶污染，立即更換全新試劑盒，徹底紫外消毒實驗臺面、移液器

公司正在出售的產(chǎn)品：