本試劑盒基于反轉(zhuǎn)錄PCR技術(shù)，靶向擴(kuò)增脊髓灰質(zhì)炎病毒保守核酸片段，可對(duì)人體糞便、咽拭子樣本中的病毒進(jìn)行定性檢測(cè)。產(chǎn)品特異性強(qiáng)，可精準(zhǔn)區(qū)分脊髓灰質(zhì)炎病毒與其他腸道病毒，檢測(cè)靈敏度高，能夠?qū)崿F(xiàn)早期感染與隱性感染篩查，適用于臨床小兒麻痹癥輔助診斷、疫苗免疫效果監(jiān)測(cè)、腸道病毒流行病學(xué)調(diào)查。
產(chǎn)品名稱 | 脊髓灰質(zhì)炎病毒PCR檢測(cè)試劑盒 | 貨號(hào) | YS-P015064 |
英文名稱 | Poliovirus PCR Detection Kit | 規(guī)格 | 50T |
有效期 | 12個(gè)月 | 保存 | -20℃保存 |
基礎(chǔ)原理：
引物選取脊髓灰質(zhì)炎病毒 5'UTR 高度保守區(qū)域，可廣譜篩查所有脊灰病毒血清型。
提取糞便、咽拭子病毒 RNA 反轉(zhuǎn)錄合成 cDNA，再開展 PCR 擴(kuò)增富集病毒核酸。
用于脊灰病毒野毒株與疫苗株初步分子篩查，配合后續(xù)測(cè)序完成毒株鑒定。
?操作步驟?：
樣本制備：
使用CTAB法或商業(yè)DNA提取試劑盒從組織中提取基因組DNA。
建議DNA濃度≥20 ng/μL，A260/A280比值1.8~2.0。
反應(yīng)體系配制（20 μL體系示例）：
預(yù)混PCR Master Mix（含染料、dNTPs、Taq酶等）
特異性引物混合液
模板DNA（2~5 μL）
補(bǔ)充無(wú)核酸酶水至終體積。
PCR擴(kuò)增程序：
預(yù)變性：95℃ 5分鐘；
循環(huán)階段（40~45 cycles）：95℃ 10秒 → 60℃ 30秒（采集熒光信號(hào)）；
熔解曲線分析：60~95℃（可選，用于驗(yàn)證擴(kuò)增特異性）。
結(jié)果判讀：
陽(yáng)性：Ct值≤35且熔解曲線峰單一；
陰性：Ct值≥40或無(wú)擴(kuò)增曲線；
可疑：35<Ct值<40，建議復(fù)測(cè)或結(jié)合熔解曲線分析。
?注意事項(xiàng)?：
所有耗材必須無(wú)核酸酶，吸頭一次性使用，禁止重復(fù)吸取；
陽(yáng)性模板拷貝濃度高，開蓋操作輕柔，避免氣溶膠擴(kuò)散造成全域污染；
試劑融化后冰上放置不超過 2 h，用完立即放回 - 20℃；
廢棄 PCR 管、擴(kuò)增產(chǎn)物、實(shí)驗(yàn)廢液統(tǒng)一 121℃高壓滅菌后丟棄；
試劑盒僅用于動(dòng)植物、水產(chǎn)、微生物疫病科研檢測(cè)，禁止人體臨床檢測(cè)；
移液器、操作臺(tái)定期紫外消毒，長(zhǎng)期污染需更換全新試劑盒全套試劑。
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關(guān)鍵字： 脊髓灰質(zhì)炎病毒;PCR檢測(cè)試劑盒;
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