缺氧誘導因子1α /HIF-1α重組兔單抗
原理特點
該重組兔單抗高特異性、高親和力識別HIF-1α，HIF-1α是缺氧應答核心轉(zhuǎn)錄因子，調(diào)控低氧代謝、血管新生、腫瘤缺氧適應。該抗體可高精度檢測HIF-1α表達水平，精準評估細胞缺氧活化狀態(tài)；同時可強效封閉其轉(zhuǎn)錄功能，阻斷低氧適應與腫瘤缺氧增殖。
英文名稱:HIF-1 Alpha Recombinant Rabbit mAb
中文名稱:缺氧誘導因子1α /HIF-1α重組兔單抗
Not yet tested in other applications.
Optimal working dilutions must be determined by the end user.
英文別名:HIF1; MOP1; PASD8; bHLHe78; HIF-1alpha; HIF1-ALPHA; HIF1A.
交叉反應:Human
抗體來源:Rabbit
免疫原:A synthesized peptide derived from human HIF 1 alpha
亞型:IgG
性狀:Liquid
純化方法:affinity purified by Protein A
克隆類型:Recombinant
克隆號：4H12
理論分子量：93 kDa
濃度：1mg/ml
儲存液：0.01M TBS (pH7.4) with 1% BSA, 0.02% Proclin300 and 50% Glycerol.
保存條件：Shipped at 4℃. Store at -20℃ for one year. Avoid repeated freeze/thaw cycles.
注意事項：This product as supplied is intended for research use only, not for use in human, therapeutic or diagnostic applications.
靶點背景
靶點背景：HIF-1α 是核心低氧轉(zhuǎn)錄調(diào)控亞基，常氧快速降解，低氧穩(wěn)定入核結(jié)合 HIF-1β，啟動數(shù)百種低氧耐受、糖酵解、血管生成基因表達。
作用原理：體外基因重組表達兔源單抗，無動物免疫流程，精準靶向 HIF-1α 特異性表位，不識別 HIF-2α、HIF-3α 亞型。
產(chǎn)品特點：批次零差異、親和力高、背景極低；支持多色熒光、mIHC、大樣本標準化定量，適合高分文獻與臨床前轉(zhuǎn)化實驗，穩(wěn)定性優(yōu)于傳統(tǒng)雜交瘤單抗。
樣本處理與實驗操作
1. Western Blot（免疫印跡）
樣本制備
細胞樣本：PBS洗滌2-3次，加入RIPA裂解液（含1% PMSF和磷酸酶抑制劑），冰上裂解30分鐘，12000rpm離心15分鐘取上清，BCA法定量蛋白濃度
組織樣本：液氮研磨成粉末，加入裂解液冰上裂解，離心后取上清，調(diào)整蛋白濃度至一致
變性處理：加入5×SDS上樣緩沖液，95℃加熱5-10分鐘，冷卻后上樣
抗體孵育
轉(zhuǎn)膜完成后，用5% BSA或牛奶封閉液室溫封閉1-2小時
一抗稀釋后4℃孵育過夜（12-16小時），或室溫孵育1-2小時；孵育時保證膜完全浸沒在抗體溶液中
TBST緩沖液洗滌3次，每次5分鐘；加入二抗（1:5000-1:10000稀釋）室溫孵育1-2小時
再次洗滌后，用ECL發(fā)光液顯影，通過凝膠成像系統(tǒng)采集圖像
2. IHC-P（石蠟切片免疫組化）
樣本前處理
脫蠟水化：依次放入二甲苯（2次，每次10分鐘）、無水乙醇、95%乙醇、80%乙醇、70%乙醇（各5分鐘），最后用PBS沖洗
抗原修復：將切片放入檸檬酸鹽緩沖液（pH6.0）中，微波爐加熱至沸騰，保持10-15分鐘，自然冷卻至室溫
封閉處理：3% H?O?室溫孵育10分鐘滅活內(nèi)源性過氧化物酶，PBS沖洗后用10%山羊血清封閉30分鐘
抗體孵育
一抗稀釋后滴加在切片上，4℃孵育過夜；孵育時置于濕盒中，防止液體揮發(fā)
次日室溫復溫30分鐘，PBS沖洗3次，每次5分鐘；加入二抗（生物素標記）室溫孵育30分鐘
PBS沖洗后，加入ABC復合物室溫孵育30分鐘，DAB顯色劑顯色（顯微鏡下觀察控制時間，通常3-10分鐘），蘇木素復染后脫水封片
3. ICC/IF（細胞免疫熒光）
樣本制備
細胞爬片培養(yǎng)至70-80%匯合度，PBS洗滌2次，4%多聚甲醛固定15-20分鐘
通透處理（根據(jù)抗體類型選擇）：0.1% Triton X-100室溫孵育10分鐘，PBS沖洗3次
封閉處理：5% BSA室溫封閉30-60分鐘，減少非特異性結(jié)合
抗體孵育
一抗稀釋后滴加在爬片上，4℃孵育過夜，或室溫孵育1-2小時
PBS沖洗3次，每次5分鐘；加入熒光標記二抗（1:200-1:500稀釋），室溫避光孵育30-60分鐘
再次沖洗后，用抗淬滅封片液封片，熒光顯微鏡或共聚焦顯微鏡下觀察采集圖像
4. ELISA（酶聯(lián)免疫吸附試驗）
包被與封閉
用包被緩沖液（如碳酸鹽緩沖液pH9.6）稀釋抗原至合適濃度，每孔加入100μl，4℃包被過夜
棄去包被液，PBST洗滌3次，每次3分鐘；加入封閉液（5% BSA）每孔200μl，37℃孵育1-2小時
抗體孵育
一抗按比例稀釋后，每孔加入100μl，37℃孵育1-2小時，或4℃孵育過夜
PBST洗滌3次，加入稀釋好的酶標二抗，每孔100μl，37℃孵育1小時
洗滌后加入底物溶液（如TMB）每孔100μl，37℃避光顯色10-20分鐘，加入終止液（2M H?SO?），用酶標儀在450nm波長讀取OD值
公司正在出售的產(chǎn)品
細胞色素P450 8B1抗體 | Alexa Fluor 680標記的羊抗小鼠IgG H&L | C2CD4C Antibody Blocking Peptide |
FBXO42蛋白抗體 | 生物素標記的羊抗豚鼠IgG H&L | phospho-PRKAB1 (Ser108) Antibody Blocking Peptide |
胞外分泌型絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶FAM20C抗體 | PE-Cy3標記的兔抗雞IgG H&L | FAM199X Antibody Blocking Peptide |
甘氨酰胺核苷酸合成酶單克隆抗體 | 生物素標記的兔抗馬IgG H&L | SREBP-2 Antibody Blocking Peptide |
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16號染色體開放閱讀框61抗體 | PE-CY5標記的兔抗牛IgG H&L | PTCD1 Antibody Blocking Peptide |
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關(guān)鍵字： 缺氧誘導因子1α /HIF-1α重組兔單;Rabbit;93 kDa;
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