本試劑盒運(yùn)用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附檢測(cè)技術(shù)，固相酶標(biāo)板微孔包被純化的大鼠HIF-1α特異性抗體，加入梯度標(biāo)準(zhǔn)品和待測(cè)大鼠組織、細(xì)胞樣本，樣本中的HIF-1α抗原與固相抗體特異性結(jié)合，洗板去除游離成分，加入辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的HIF-1α檢測(cè)抗體，形成夾心免疫復(fù)合物，洗滌后進(jìn)行底物顯色反應(yīng)，終止后測(cè)定吸光度，依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線精準(zhǔn)定量樣本中HIF-1α的表達(dá)水平。
基本參數(shù)?：
產(chǎn)品名稱(chēng)：大鼠低氧誘導(dǎo)因子1α(HIF-1α)ELISA試劑盒
英文名稱(chēng)：HIF-1α ELISA Kit
貨號(hào)：Y-E1275
規(guī)格：48T/96T
靈敏度：最低檢測(cè)靈敏度≤1.0pg/mL
檢測(cè)范圍：2.0pg/mL - 90pg/mL
反應(yīng)時(shí)間：總反應(yīng)時(shí)長(zhǎng)110分鐘（蛋白結(jié)合80分鐘、顯色30分鐘）
保存條件：2-8℃避光保存，HIF抗體組分低溫密封
有效期：未開(kāi)封12個(gè)月，開(kāi)蓋后25天內(nèi)使用
顯色系統(tǒng)：高穩(wěn)定TMB顯色體系，適配轉(zhuǎn)錄因子檢測(cè)
檢測(cè)波長(zhǎng)：450nm主波長(zhǎng)檢測(cè)
標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制：四參數(shù)Logistic擬合曲線，R2≥0.992
特異性：特異性結(jié)合大鼠HIF-1α，與HIF-2α無(wú)交叉反應(yīng)
重復(fù)性：板內(nèi)CV≤8%，板間CV≤10%
注意事項(xiàng)：低氧因子極易降解，樣本采集后快速低溫凍存；全程避免常溫放置過(guò)久。
關(guān)鍵注意事項(xiàng)：
實(shí)驗(yàn)前需仔細(xì)閱讀對(duì)應(yīng)試劑盒的說(shuō)明書(shū)，不同試劑盒的孵育時(shí)間、加樣量可能存在差異
所有試劑需按要求儲(chǔ)存，未用完的試劑需密封后放回規(guī)定溫度（通常2-8℃或-20℃）
避免試劑污染，不同組分的移液器槍頭需分開(kāi)使用
洗板時(shí)需確保每孔都被洗滌液覆蓋，防止出現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果
顯色過(guò)程需避光，避免陽(yáng)光直射影響結(jié)果
實(shí)驗(yàn)步驟如下：
試劑盒提前 36min 室溫復(fù)溫，濃縮洗滌液 1:28 稀釋?zhuān)笫笕毖踅M織勻漿冰浴防止蛋白降解。
酶標(biāo)板每孔加入 100μL 梯度 HIF-1α 標(biāo)準(zhǔn)蛋白、組織上清、空白液。
一步混合酶結(jié)合液 200μL / 孔，密封 37℃避光孵育 78min。
洗滌液浸泡 48s，洗滌 5 次，垂直吸干微孔殘留洗液。
單一顯色液避光孵育 18min。
硫酸終止液終止顯色，震蕩混勻。
酶標(biāo)儀 450nm 測(cè)吸光度，計(jì)算 HIF-1α 表達(dá)水平。
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關(guān)鍵字： 大鼠低氧誘導(dǎo)因子1α;HIF-1α;ELISA試劑盒;
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