產(chǎn)品屬性

商品介紹

英文別名：LRR and PYD domains-containing protein 3; AGTAVPRL; AII/AVP antibody Angiotensin/vasopressin receptor AII/AVP like; Angiotensin/vasopressin receptor AII/AVP-like; C1orf7; Caterpiller protein 1.1; CIAS 1; CIAS1; CLR1.1; Cold autoinflammatory syndrome 1; Cold autoinflammatory syndrome 1 protein; Cryopyrin; Familial cold autoinflammatory syndrome; FCAS; FCU; Muckle-Wells syndrome; MWS; NACHT; NACHT LRR and PYD containing protein 3; NALP 3; NALP3; NALP3_HUMAN; NLRP3; PYPAF 1; PYPAF1 antibody PYRIN containing APAF1 like protein 1; PYRIN-containing APAF1-like protein 1.

靶標(biāo)：NALP3/NLRP3，炎癥小體核心蛋白，介導(dǎo)細(xì)胞焦亡、炎癥應(yīng)答

熒光基團(tuán)：BF647；Ex=647 nm，Em=666 nm

抗體類型：兔多克隆 / 重組單抗

應(yīng)用：細(xì)胞免疫熒光 ICC、組織 IF、流式檢測炎癥活化水平

種屬：人、小鼠、大鼠通用

稀釋：IF 1:100–1:500

儲存：-20℃避光分裝

原理特點(diǎn)

本抗體采用BF647遠(yuǎn)紅光標(biāo)記，特異性識別NALP3炎癥小體核心蛋白，NALP3可感知細(xì)胞應(yīng)激、損傷信號，組裝炎癥小體，介導(dǎo)下游炎癥因子活化與細(xì)胞焦亡、炎癥反應(yīng)，是天然免疫與炎癥疾病的關(guān)鍵靶點(diǎn)。該抗體特異性強(qiáng)、熒光抗干擾能力優(yōu)異，可精準(zhǔn)定位胞內(nèi)NALP3蛋白的表達(dá)與聚集情況，適配共聚焦成像、炎癥細(xì)胞定量檢測，用于炎癥小體活化機(jī)制研究。

靶點(diǎn)背景

1. NLRP3 是炎癥小體模式識別受體，感知病原體、損傷相關(guān)分子模式

2. 組裝 NLRP3 炎癥小體激活 Caspase-1，誘導(dǎo) IL-1β 成熟釋放，介導(dǎo)炎癥焦亡

3. 自身炎癥病、代謝炎癥、感染免疫、慢性炎癥機(jī)制研究關(guān)鍵靶點(diǎn)

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樣本處理與實(shí)驗(yàn)操作

1. Western Blot（免疫印跡）

樣本制備

細(xì)胞樣本：PBS洗滌2-3次，加入RIPA裂解液（含1% PMSF和磷酸酶抑制劑），冰上裂解30分鐘，12000rpm離心15分鐘取上清，BCA法定量蛋白濃度

組織樣本：液氮研磨成粉末，加入裂解液冰上裂解，離心后取上清，調(diào)整蛋白濃度至一致

變性處理：加入5×SDS上樣緩沖液，95℃加熱5-10分鐘，冷卻后上樣

抗體孵育

轉(zhuǎn)膜完成后，用5% BSA或牛奶封閉液室溫封閉1-2小時(shí)

一抗稀釋后4℃孵育過夜（12-16小時(shí)），或室溫孵育1-2小時(shí)；孵育時(shí)保證膜完全浸沒在抗體溶液中

TBST緩沖液洗滌3次，每次5分鐘；加入二抗（1:5000-1:10000稀釋）室溫孵育1-2小時(shí)

再次洗滌后，用ECL發(fā)光液顯影，通過凝膠成像系統(tǒng)采集圖像

2. IHC-P（石蠟切片免疫組化）

樣本前處理

脫蠟水化：依次放入二甲苯（2次，每次10分鐘）、無水乙醇、95%乙醇、80%乙醇、70%乙醇（各5分鐘），最后用PBS沖洗

抗原修復(fù)：將切片放入檸檬酸鹽緩沖液（pH6.0）中，微波爐加熱至沸騰，保持10-15分鐘，自然冷卻至室溫

封閉處理：3% H?O?室溫孵育10分鐘滅活內(nèi)源性過氧化物酶，PBS沖洗后用10%山羊血清封閉30分鐘

抗體孵育

一抗稀釋后滴加在切片上，4℃孵育過夜；孵育時(shí)置于濕盒中，防止液體揮發(fā)

次日室溫復(fù)溫30分鐘，PBS沖洗3次，每次5分鐘；加入二抗（生物素標(biāo)記）室溫孵育30分鐘

PBS沖洗后，加入ABC復(fù)合物室溫孵育30分鐘，DAB顯色劑顯色（顯微鏡下觀察控制時(shí)間，通常3-10分鐘），蘇木素復(fù)染后脫水封片

3. ICC/IF（細(xì)胞免疫熒光）

樣本制備

細(xì)胞爬片培養(yǎng)至70-80%匯合度，PBS洗滌2次，4%多聚甲醛固定15-20分鐘

通透處理（根據(jù)抗體類型選擇）：0.1% Triton X-100室溫孵育10分鐘，PBS沖洗3次

封閉處理：5% BSA室溫封閉30-60分鐘，減少非特異性結(jié)合

抗體孵育

一抗稀釋后滴加在爬片上，4℃孵育過夜，或室溫孵育1-2小時(shí)

PBS沖洗3次，每次5分鐘；加入熒光標(biāo)記二抗（1:200-1:500稀釋），室溫避光孵育30-60分鐘

再次沖洗后，用抗淬滅封片液封片，熒光顯微鏡或共聚焦顯微鏡下觀察采集圖像

4. ELISA（酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)）

包被與封閉

用包被緩沖液（如碳酸鹽緩沖液pH9.6）稀釋抗原至合適濃度，每孔加入100μl，4℃包被過夜

棄去包被液，PBST洗滌3次，每次3分鐘；加入封閉液（5% BSA）每孔200μl，37℃孵育1-2小時(shí)

抗體孵育

一抗按比例稀釋后，每孔加入100μl，37℃孵育1-2小時(shí)，或4℃孵育過夜

PBST洗滌3次，加入稀釋好的酶標(biāo)二抗，每孔100μl，37℃孵育1小時(shí)

洗滌后加入底物溶液（如TMB）每孔100μl，37℃避光顯色10-20分鐘，加入終止液（2M H?SO?），用酶標(biāo)儀在450nm波長讀取OD值