BF555標(biāo)記的內(nèi)皮粘蛋白EMCN抗體
原理特點
本抗體采用BF555橙紅色熒光標(biāo)記，光穩(wěn)定性強(qiáng)、成像分辨率高，特異性靶向內(nèi)皮粘蛋白EMCN。EMCN是血管內(nèi)皮細(xì)胞特異性黏附蛋白，參與血管生成、內(nèi)皮屏障構(gòu)建、炎癥細(xì)胞浸潤及組織血管重塑，是血管內(nèi)皮細(xì)胞的經(jīng)典標(biāo)志物。該抗體特異性識別內(nèi)皮細(xì)胞源性EMCN蛋白，非特異吸附少，適配共聚焦熒光成像、組織血管染色、內(nèi)皮細(xì)胞功能及血管病變相關(guān)研究。
英文名稱:Endomucin Rabbit pAb, BF555 conjugated
中文名稱:BF555標(biāo)記的內(nèi)皮粘蛋白EMCN抗體
英文別名：EMCN; EMCN2; Endomucin 2; Endomucin; Endomucin-2; Endothelial sialomucin; Gastric cancer antigen Ga34; MUC-14; MUCEN_HUMAN; Mucin 14; Mucin-14.
靶標(biāo)：EMCN 內(nèi)皮粘蛋白，血管內(nèi)皮特異性表面標(biāo)志物，標(biāo)記微血管、新生血管
熒光標(biāo)記：BF555（對標(biāo) AF555/Cy3）；Ex=555 nm，Em=572 nm
抗體類型：兔多克隆為主
種屬反應(yīng)：人、小鼠、大鼠、犬
適用實驗：組織免疫熒光、石蠟 / 冰凍切片 IHC、ICC、血管示蹤
功能用途：腫瘤新生血管生成、血管發(fā)育、內(nèi)皮細(xì)胞鑒定、缺血組織血管重構(gòu)
儲存：-20℃避光，12 個月有效期
靶點背景
1. EMCN 是血管內(nèi)皮特異性跨膜糖蛋白，高表達(dá)于微血管、毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞
2. 參與血管生成、內(nèi)皮細(xì)胞黏附、血管穩(wěn)態(tài)維持，區(qū)分動靜脈內(nèi)皮亞型
3. 組織微血管密度統(tǒng)計、血管新生、腫瘤血管生成病理檢測標(biāo)志物
樣本處理與實驗操作
1. Western Blot（免疫印跡）
樣本制備
細(xì)胞樣本：PBS洗滌2-3次，加入RIPA裂解液（含1% PMSF和磷酸酶抑制劑），冰上裂解30分鐘，12000rpm離心15分鐘取上清，BCA法定量蛋白濃度
組織樣本：液氮研磨成粉末，加入裂解液冰上裂解，離心后取上清，調(diào)整蛋白濃度至一致
變性處理：加入5×SDS上樣緩沖液，95℃加熱5-10分鐘，冷卻后上樣
抗體孵育
轉(zhuǎn)膜完成后，用5% BSA或牛奶封閉液室溫封閉1-2小時
一抗稀釋后4℃孵育過夜（12-16小時），或室溫孵育1-2小時；孵育時保證膜完全浸沒在抗體溶液中
TBST緩沖液洗滌3次，每次5分鐘；加入二抗（1:5000-1:10000稀釋）室溫孵育1-2小時
再次洗滌后，用ECL發(fā)光液顯影，通過凝膠成像系統(tǒng)采集圖像
2. IHC-P（石蠟切片免疫組化）
樣本前處理
脫蠟水化：依次放入二甲苯（2次，每次10分鐘）、無水乙醇、95%乙醇、80%乙醇、70%乙醇（各5分鐘），最后用PBS沖洗
抗原修復(fù)：將切片放入檸檬酸鹽緩沖液（pH6.0）中，微波爐加熱至沸騰，保持10-15分鐘，自然冷卻至室溫
封閉處理：3% H?O?室溫孵育10分鐘滅活內(nèi)源性過氧化物酶，PBS沖洗后用10%山羊血清封閉30分鐘
抗體孵育
一抗稀釋后滴加在切片上，4℃孵育過夜；孵育時置于濕盒中，防止液體揮發(fā)
次日室溫復(fù)溫30分鐘，PBS沖洗3次，每次5分鐘；加入二抗（生物素標(biāo)記）室溫孵育30分鐘
PBS沖洗后，加入ABC復(fù)合物室溫孵育30分鐘，DAB顯色劑顯色（顯微鏡下觀察控制時間，通常3-10分鐘），蘇木素復(fù)染后脫水封片
3. ICC/IF（細(xì)胞免疫熒光）
樣本制備
細(xì)胞爬片培養(yǎng)至70-80%匯合度，PBS洗滌2次，4%多聚甲醛固定15-20分鐘
通透處理（根據(jù)抗體類型選擇）：0.1% Triton X-100室溫孵育10分鐘，PBS沖洗3次
封閉處理：5% BSA室溫封閉30-60分鐘，減少非特異性結(jié)合
抗體孵育
一抗稀釋后滴加在爬片上，4℃孵育過夜，或室溫孵育1-2小時
PBS沖洗3次，每次5分鐘；加入熒光標(biāo)記二抗（1:200-1:500稀釋），室溫避光孵育30-60分鐘
再次沖洗后，用抗淬滅封片液封片，熒光顯微鏡或共聚焦顯微鏡下觀察采集圖像
4. ELISA（酶聯(lián)免疫吸附試驗）
包被與封閉
用包被緩沖液（如碳酸鹽緩沖液pH9.6）稀釋抗原至合適濃度，每孔加入100μl，4℃包被過夜
棄去包被液，PBST洗滌3次，每次3分鐘；加入封閉液（5% BSA）每孔200μl，37℃孵育1-2小時
抗體孵育
一抗按比例稀釋后，每孔加入100μl，37℃孵育1-2小時，或4℃孵育過夜
PBST洗滌3次，加入稀釋好的酶標(biāo)二抗，每孔100μl，37℃孵育1小時
洗滌后加入底物溶液（如TMB）每孔100μl，37℃避光顯色10-20分鐘，加入終止液（2M H?SO?），用酶標(biāo)儀在450nm波長讀取OD值
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關(guān)鍵字： BF555標(biāo)記的內(nèi)皮粘蛋白EMCN抗體;Endomucin Rabbit pAb;100ul;
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