北京生夏蛋白技術有限公司/北京華利世
朱凱15810267201（手機微信）

用于N-linked糖蛋白（包括抗體)經過PNGase F糖苷酶酶切后溶液中聚糖的超快速標記。 標記后的聚糖具有靈敏的熒光和質譜離子化特性。使用LC-FLR or LC-MS定量分析檢測。該試劑獨特的化學屬性提供了更高的熒光定量和最高的質譜響應。

物理形態(tài): 凍干粉
分子量: 427.1850Da
分子式： C21H25N5O5
標記的糖胺的質量偏移數： +C17H20N4O2=312.3663Da
Labeled N-Glycan(Da) = Released N-Glycan + Glycan Label Reagent - Reaction by-product(C4H5NO3, MW:115.0268) - H
聚糖標簽溶解：55ul無水DMF溶解4.5mg N-聚糖標簽-W即濃度=82ug/ul（現用現配）
無水DMF（HLS DMF001）：只用于聚糖標簽干粉試劑的溶解和標記后樣品的稀釋
儲存條件：凍干粉存儲在-20℃冰箱，有效期見產品標簽
保質期：凍干粉-20℃保質期24個月
適用范圍: 每瓶4.5mg標簽試劑溶解后可以標記5個酶切后的聚糖樣品
推薦的N-聚糖標記SOP:
- 取 10ul 1.5 ug/ul mAb 脫鹽樣品加入0.6ml低蛋白吸附離心管
- 加 10ul 3% BT Surfactant w/5mM TCEP 變性還原緩沖液（50mM HEPES, pH=7.9) 混勻；
- 干浴95°C 加熱3min； 然后冷卻至室溫
- 加 10μl 1.5 unit/ul rPNGase F糖苷酶 混勻， 干浴50°C 孵育15-30min。然后冷卻至室溫
- 加 10ul 82 ug/ul N-Glycan聚糖標簽試劑混勻， 室溫反應5min。
- 加 15ul 無水DMF； 加45ul 乙jing混勻。
- 標記后的N聚糖樣品用于LC-FLR or LC-MS檢測分析
質量控制｜Quality Control
產品組分：經LC色譜純化， QEHF 超高分辨質譜分析， 試劑中N-聚糖標簽：NHS化合物為3:2
標記效率：mAb抗體糖蛋白濃度為0.37ug/ul, N-聚糖濃度為20ug/ul標記PNGase F酶切15ug糖蛋白釋放的N-聚糖， 標記效率99.5%
熱穩(wěn)定性: N-聚糖標簽試劑在無水DMF室溫下8小時穩(wěn)定； 標記的糖胺在室溫24小時穩(wěn)定，質譜電離耐熱320℃
化學不穩(wěn)定性： 親和試劑SDS, Tris, DTT, 胺，硫醇等濃度大于0.1mM不穩(wěn)定。