人膽堿激酶β(CHKb)重組蛋白可開展 CHKβ 激酶活性測定、磷脂酰膽堿合成代謝研究、細胞膜脂質穩(wěn)態(tài)調控分析、底物親和力檢測與酶抑制劑篩選試驗。

型號：YS-DB2625

產品名稱：人膽堿激酶β(CHKb)重組蛋白

物種：Homo sapiens (Human，人)

英文名稱：Recombinant Choline Kinase Beta (CHKb)

CHETK; CHKL; CKEKB; Choline Kinase Like; choline/ethanolamine kinase beta

酶與激酶

物種：Homo sapiens (Human，人)

來源：原核表達

宿主E.coli

內毒素水平：<1.0EU/μg(LAL法測定)

亞細胞定位：：分泌

預測分子量：22.5kDa

實際分子量：23kDa(差異分析請參閱說明書)

片段與標簽：Phe238~Ser395 with N-terminal His Tag

緩沖液成份：磷酸鹽緩沖液（pH7.4，含有 0.01% SKL, 1mM DTT, 5% Trehalose和Proclin300.）

性狀：凍干粉

純度：> 90%

等電點：4.8

應用：Positive Control; Immunogen; SDS-PAGE; WB.

規(guī)格：10μg、50μg、200μg、1mg、5mg
檢測原理：

SDS-PAGE 灰度純度分析：電泳分離雜質蛋白，統(tǒng)計目標蛋白純度占比。

280nm 紫外快速濃度初篩：快速估算蛋白濃度。

激酶活性檢測：以 ATP 為磷酸供體催化膽堿磷酸化生成磷酸膽堿，檢測 ADP 生成速率表征激酶活力。

qPCR 宿主 DNA 殘留檢測：去除核酸雜質干擾。
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使用方法：

1. 蛋白復溶

解凍：從低溫冰箱取出蛋白后，立即置于冰上緩慢解凍，避免室溫放置導致蛋白變性。

緩沖液選擇：根據(jù)蛋白特性選擇合適的復溶緩沖液，常用基礎緩沖液為10-50mM Tris-HCl（pH7.0-8.0）或PBS（pH7.2-7.4）；部分蛋白需添加100-300mM NaCl維持滲透壓，或添加1-5mM DTT、β-巰基乙醇等還原劑保持蛋白穩(wěn)定性。

復溶操作：根據(jù)蛋白濃度，加入適量緩沖液使終濃度達到0.1-1.0mg/mL（部分難溶蛋白可適當調整濃度）；輕輕顛倒離心管或用移液器緩慢吹打混勻，避免劇烈震蕩；置于冰上靜置10-30分鐘，期間可輕柔混勻2-3次，確保蛋白充分溶解。

2. 活性測定（以酶類蛋白為例）

試劑準備：根據(jù)酶的催化特性，配制相應的底物溶液、輔助因子溶液、反應緩沖液等；確保所有試劑均為分析純以上級別，且在有效期內。

反應體系優(yōu)化：通過預實驗確定酶的最適反應溫度、pH值、底物濃度、酶濃度等參數(shù)；通常反應體系體積為50-200μL，酶濃度需根據(jù)活性高低調整。

檢測操作：按照優(yōu)化后的反應體系依次加入試劑，啟動反應后，通過分光光度法、熒光法、比色法等檢測方法，實時或終點檢測底物消耗、產物生成的信號變化。

活性計算：根據(jù)檢測到的信號變化值，結合摩爾消光系數(shù)、熒光量子產率等參數(shù)，計算酶的活性單位（U）；1U定義為在特定條件下，每分鐘催化1μmol底物轉化為產物的酶量。

3. Western Blot檢測

樣品處理：取適量復溶后的蛋白溶液，加入等體積的2×SDS上樣緩沖液，沸水浴加熱5-10分鐘使蛋白變性；若蛋白含二硫鍵，可添加β-巰基乙醇或DTT輔助變性。

電泳分離：將變性后的樣品加入SDS-PAGE凝膠的上樣孔，同時加入蛋白Marker；先以80V電壓運行濃縮膠（約30分鐘），待樣品進入分離膠后，調整電壓至120V繼續(xù)電泳（約60-90分鐘），直至蛋白Marker分離清晰。

轉膜操作：根據(jù)蛋白分子量選擇合適孔徑的PVDF或NC膜；采用濕轉或半干轉法將凝膠中的蛋白轉移至膜上，濕轉條件通常為200-300mA電流，轉膜時間60-120分鐘；轉膜后可通過麗春紅染色確認轉膜效果。

封閉與孵育：用5%脫脂牛奶或BSA溶液封閉膜1-2小時，封閉非特異性結合位點；加入一抗（按說明書推薦比例稀釋），4℃孵育過夜；次日用TBST緩沖液洗膜3次，每次10分鐘；加入HRP標記的二抗（按說明書推薦比例稀釋），室溫孵育1小時；再次用TBST緩沖液洗膜3次，每次10分鐘。

顯色檢測：將膜浸入ECL化學發(fā)光試劑中，避光孵育1-5分鐘；使用化學發(fā)光成像系統(tǒng)曝光檢測蛋白條帶，根據(jù)條帶位置和灰度分析蛋白表達情況。