小鼠膽堿激酶α(CHKa)重組蛋白用于磷脂酰膽堿合成代謝研究、細(xì)胞膜脂質(zhì)合成、細(xì)胞增殖及脂質(zhì)代謝紊亂機(jī)制實(shí)驗(yàn)。
型號(hào)：YS-DB2509
產(chǎn)品名稱：小鼠膽堿激酶α(CHKa)重組蛋白
物種：Mus musculus (Mouse，小鼠)
英文名稱：Recombinant Choline Kinase Alpha (CHKa)
CHK-A; CHK; CKI; EK; Choline Kinase; Ethanolamine kinase
信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)
酶與激酶
代謝通路
肝膽病學(xué)
物種：Mus musculus (Mouse，小鼠)
來(lái)源：原核表達(dá)
宿主E.coli
內(nèi)毒素水平：<1.0EU/μg(LAL法測(cè)定)
亞細(xì)胞定位：：Cytoplasm.
預(yù)測(cè)分子量：57.5kDa
實(shí)際分子量：61kDa(差異分析請(qǐng)參閱說(shuō)明書)
片段與標(biāo)簽：Met1~Glu250 with N-terminal His and GST Tag
緩沖液成份：磷酸鹽緩沖液（pH7.4，含有 0.01% SKL, 1mM DTT, 5% Trehalose和Proclin300.）
性狀：凍干粉
純度：> 90%
等電點(diǎn)：6.2
應(yīng)用：Positive Control; Immunogen; SDS-PAGE; WB.
規(guī)格：10μg、50μg、200μg、1mg、5mg
檢測(cè)原理：
膽堿磷酸化偶聯(lián) NADH 分光檢測(cè)：CHKα 催化膽堿磷酸化生成磷酸膽堿，偶聯(lián)酶體系消耗 NADH，340nm 吸光度下降速率定量激酶酶活。
特異性抗體 WB 定性驗(yàn)證：CHKα 抗體特異性結(jié)合重組蛋白，發(fā)光條帶匹配理論分子量，確認(rèn)表達(dá)產(chǎn)物為目標(biāo)蛋白。
無(wú)機(jī)磷顯色定量法：反應(yīng)釋放游離磷酸基團(tuán)，鉬酸鹽顯色體系生成藍(lán)色磷鉬絡(luò)合物，700nm 比色測(cè)定磷酸生成量反映酶活。
SDS-PAGE 電泳純度質(zhì)控：電泳分離蛋白，考染后灰度分析計(jì)算蛋白純度，檢測(cè)降解片段與雜蛋白殘留。
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復(fù)溶操作要點(diǎn)：
復(fù)溶前準(zhǔn)備
工具消毒：移液槍頭、離心管需經(jīng)過(guò)高壓滅菌或一次性無(wú)菌處理，避免引入污染。
緩沖液選擇：優(yōu)先使用產(chǎn)品說(shuō)明書推薦的專用復(fù)溶緩沖液，若無(wú)推薦可使用：
基礎(chǔ)型：20mM Tris-HCl（pH7.5）+ 150mM NaCl
保護(hù)型：在基礎(chǔ)緩沖液中添加5%甘油、1mM DTT或0.1% BSA
特殊蛋白：膜蛋白需添加去垢劑（如0.05% Triton X-100），酶類需添加輔酶因子
復(fù)溶步驟
短暫離心：將凍干蛋白管置于離心機(jī)，4℃下8000rpm離心30秒，使底部蛋白集中。
緩慢加液：沿管壁緩慢加入適量緩沖液，避免直接沖擊蛋白沉淀。
溫和溶解：輕輕搖晃離心管或用移液槍緩慢吹吸，禁止渦旋振蕩（易導(dǎo)致蛋白變性）。
靜置溶解：4℃靜置10-30分鐘，難溶蛋白可延長(zhǎng)至1小時(shí)，期間每隔10分鐘輕輕混勻一次。
關(guān)鍵字： 小鼠膽堿激酶α;CHKa;重組蛋白;
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